在做荧光定量pcr三个平行时候，怎么做才能使三个平行的差异降低？

加样过程中注意避光，换枪头，尽量快

加大实验体系，比如10微升换成15或者20微升，这样可以避免加样误差。

1.用同一个白枪尖先加模板，所有的样品枪打到同一个档。2，加酶的mix的时候，每个孔换枪尖。

主要还是加样的问题，加样手别抖，确保每一个孔的体系都是一致。可以尝试用排枪加。

1.增加测试方法的精密度

不同精密度的测试方法。平行样结果差异不同，通过选取精密度更小的方法可减少平行样的结果差异。

通常平行样测试中，所使用的测量方法应是一个标准化的方法。这样一个方法应是稳健的，即测量结果对测量过程中的微小变动，不会产生意外的大变动。描述测量方法的文件应该是明确的和完整的。所有涉及该程序的环境、试剂和设备、设备的初始检查以及测试样本的准备的重要操作都应该包括在测试方法中，这些方法尽可能地参考其他的对操作人员有用的书面说明，并精确说明测试结果和计算方法以及应该报告的有效数字位数。任何不清晰的表达，将可能带来测试人员理解上的不同，从而引人偶然误差，可能影响平行样结果的精密度。

2.提高测试人员的技术水平，减少试剂和环境的变化

测试人员的技术水平和受培训程度高低，会对测试结果带来一定的偶然误差。作为检测实验室，应制定详细的培训和考核标准，以提升人员的技术水平和操作稳定性。

平行样测试中所使用的试剂，如果试剂是同批次的且已验收合格的，则其带来的变异因素应该是可控范围内的。检测实验室应制定相应的试剂验收程序和供应商评估程序，以确保试剂的品质合格和稳定。

平行样测试过程中，实验室的温湿度条件或其他的环境条件，将可能通过影响测试设备、测试人员等冈素间接影响测试结果的精密度，也可能直接地对测试结果精密度造成影响。例如温湿度条件可能会影响光谱类化学分析设备的稳定性，从而间接影响测试结果的精密度。通风橱上的尘埃，如不及时清理，可能在某些元素的痕量检测过程中，带来污染，从而影响平行样测试结果的精密度。

减少平行的差异方法：

1、样品的均匀性

用于平行样测试的样品，如样品本身不均匀，通常会增大平行样结果差异。因此，进行平行样测试，应尽可能采用足够均匀的样品进行测试。

为了减少平行样结果差异，平行样测试的样品在用于测试前，最好将物料进行专门的匀质化处理(例如用粉碎机将样品打碎后混匀)，或是适当增大取样量，以获得更有代表性的样品。当然，样品量的增加受到方法本身多种因素的影响，例掘样品量的增加可能带来后续样品处理的困难，或带来更明显的基体干扰，导致测试难以进行。

2、平行样间的分析间隔

某些物质的含量或性质会随着时间而改变(例如一些需显色或者衍生化反应后分析的待测物质)，此时随着平行样间的分析间隔增加．可能会增大平行样结果的差异。同时，由于测量仪器也可能随时间变化发生波动．因而平行样测试时，最好能规定并尽量减少平行样问的测量时间间隔。

熟悉测试方法，了解其中的关键步骤在测试时间上的要求，这一点对于减少平行样测试结果问的差异很重要。例如ISO 17075方法测试皮革中的六价铬含量，样品溶液在显色后要求在10～20min内完成分析，否则平行样结果间的差异可能增加。

3、检测设备或仪器的稳定性

检测设备的稳定性高低，会对平行样的测试结果精密度产生直接的影响。当检测设备使用的年限较长而老化，导致其短期稳定性下降的，即使平行样测试是在短暂的时间间隔内完成，检测设备的仪器状态或性能，仍然有可能出现波动，从而导致测试结果的精密度增大。

在检测实验室内，制定合适频率的定期的仪器设备性能检查计划，和恰当的仪器设备使用前的性能评估程序，有助于测试人员了解仪器设备的状态和测试工作的开展，确保检测设备或仪器的稳定性满足要求，可减小偶然误差，从而减少平行样结果差异。同时，设备在平行样测试的两次测量之间不应重新校准，除非校准是单个测量中一个基本的组成部分。

换用高精度的移液器，选择挂壁低的枪头