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急求大佬解决qpcr问题

相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

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D走失的猫

本人小白,做的组织RNA,内参gap值一直很高,平均ct值在25左右,跑过最小的在19,最大的值都到30多,而且,对照组,实验组1和实验组2,三组之间ct值一直不齐,差的还挺多!

蓝色的线是gap

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4 个回答

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Eason老歌迷

有帮助

可能还是你的体系问题。我的经验,在20 ul 的逆转录系统中加入1 ug RNA。然后将cDNA稀释50到100倍,(即1 ul的RT产物加49 ul 水),取 2ul 用于qRT-PCR (20 ul 体系)。GAPDH的Ct 值在19~20范围内。

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天一湖医者

有帮助

如果你确定你RNA提取 逆转过程没有问题的话,直接将高浓度的稀释一下就行。

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whilt-shirt

有帮助

看一下溶解曲线,有可能是引物特异性不好,也有有可能是组织RNA降解了

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bamboopiggy

有帮助

可能gapdh在你的实验中不适合做内参,你换个内参例如用actin试试

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