在跑完定量PCR后，如何处理相对定量数据？

3 个回答

天一湖医者

2022-06-29

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公式： R=(1+E1)^△Ct1(Control-Sample)/(1+E2)^△Ct2(Control-Sample)

其中，E1：目的基因引物扩增效率；E2：内参基因引物扩增效率；△Ct1：实验组目的基因Ct值差；△Ct2：对照组目的基因Ct值差。你观察这个公式时候就发现，当扩增效率E为1（即100%）时，该公式就等于2^-△△Ct，这就是为什么会有2^-△△Ct方法的原因！

Eason老歌迷

2022-06-29

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qPCR的数据相对定量分析其实很简单。分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单的说就是：首先将一次实验的所有基因Ct值整理好，之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值，得到的数就是△Ct；换成公式就是：△Ct=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；然后，将每一组样本每一个目的基因的△Ct都算好，整理进Excel，用本次实验中待研究样本的△Ct减去对照组样本的△Ct，并同时对所有结果取相反数（就是加一个负运算，正数就变成负数，负数就变成正数），该步运算得到的结果就是-△△Ct。最后，对-△△Ct进行2的幂运算，即2^-△△Ct就得出Fold Change。

balalaLy

2022-06-29

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按照公式计算2的-▲▲CT次方，每个组都除以对照组，得到以对照组为1的相对值