混菌定量

可以，找到23srRNA序列，按照qPCR引物设计原则：

1. 引物长度：18-25bp；

2. GC含量：30%-80%，最好是40%-60%；

3. 引物Tm值最好在60℃左右，上下游两条引物Tm差异不要超过4℃；

4. 避免引物与目的基因之间发生错配，特别是引物3端，不要超过6个碱基；

5. 避免特定碱基的连续重复，特别是引物3端出现3个或以上连续的C或者G重复；

6. 避免引物自身形成发夹结构；

7. 避免引物之间形成二聚体，特别是引物3端；

8. 引物设计跨内含子，这里上下游引物可以在不同的外显子，或者同一个引物刚好跨两个外显子；

9. 80-300bp，150bp最适长度，相对短的扩增产物，扩增效率会要高；