当PCR产物有两条带的时候，怎么才能快速提高特异性？

出现多条条带表示PCR反应的特异性不高，可以进行如下优化尝试：
1.适当提高PCR的退火温度。退火温度越高，DNA分子之间的配对越困难。这样可以减少引物与模板之间非特异性的结合。
2.检查一下引物的Tm值和序列结构，如果引物Tm值过高，上下游引物Tm值相差太大，或者引物单链易形成高级结构，都不利于PCR反应。必要时重新设计引物。
3.检查一下模板纯否。模板越纯，条带越特异。反之模板杂乱（例如cDNA文库）就容易引起非特异性条带。
4.如果模板和引物无法改良，可以选用更好的聚合酶产品。高保真和高活性的酶更容易得到特异性条带。

两种方法，第一是设计引物时，在NCBI上进行预测

第二是设计温度梯度，在多个温度进行PCR并比较结果

可以做温度梯度，设置一个annealing temperature的温度梯度，找到可以跑出一条带的温度，