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你的目的条带出来了么?如果出现目的条带,可以切胶回收,如果没有出现目的条带,考虑引物不特异。或者是你pcr的退火温度不合适
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纯化核酸模板,重新设计引物试试
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PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带.非特异 性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退 火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的 酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有:①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一 来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变 性,65℃左右退火与延伸).
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