pcr扩增中出现的非特异性条带

非特异性条带的出现,其原因:

一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.

二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有:

①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.

你图一没有杂带是因为模板干净，用菌液做pcr，模板纯度比较低，是会出现杂带，只要有目的条带，就不用管杂带

一般出现非特异性条带，我们可以用下面的办法解决，降低引物和聚合酶的用量，提高退火温度，或者是采用梯度PCR法，测试能够获得最佳结果的温度退火。如果还是不行，就试试touchdown方法，退火温度从高到低，每隔一个反应温度下降1C或者怎么样的，这样可以便于扩增出特异性更好的条带。当然，如果模板可以纯化一下，或者重新制备，也可以避免有非特异物质或者是降解的片段干扰。总之就是先优化。实在不行需要重新设计引物，并且将引物序列在NCBI里面和你的样品的基因组做一下比对，看看什么位置有可能造成非特异结合。

可能是菌液的问题，菌液中含有一些非特异性组织可同步扩增