丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

pcr预变性的98度和96度有什么差别?以及2步法和三步法有什么区别呢

相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

user-title

李小亮亮

wx-share
分享

5 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

预变性的温度取决于你用的酶的要求,一定要看说明书。2步法是因为你的annealing temperature比较高,和extension temperature 接近,就可以用两步法。

user-title

天一湖医者

有帮助

一般来说差别不大。模板小一般用96,要是基因组就用98.还和时间有关。温度高,变性时间可以短一点.

user-title

balalaLy

有帮助

预变性温度要根据DNA聚合酶的特性和模板的GC含量来调整

user-title

灵枢天问

有帮助

1、步骤不同:两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,而三步法则分两次完成。

2、用时不同:两步法减少一次升降温过程,提高了反应速度,用时较短。而三步法则比两步法用时更长。

3、适用条件不同:两步法中,PCR扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长,需要降低系统温度,引物与DNA模板结合,形成局部双链。

user-title

未来9

有帮助

1、通常预变性温度为94 ℃-98 ℃,反应时间一般1-10 min。根据DNA聚合酶不同选择适合的预变性温度及反应时间是PCR反应顺利进行的关键,充分的预变性有利于DNA双链的打开。

98度和96度一般来说差别不大。模板小一般用96,要是基因组就用98.还和时间有关。温度高,变性时间可以短一点.

2、两步法和三步法的区别

1、步骤不同:两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,而三步法则分两次完成。

2、用时不同:两步法减少一次升降温过程,提高了反应速度,用时较短。而三步法则比两步法用时更长。
3、适用条件不同:两步法中,PCR扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长,需要降低系统温度,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序