一枝七叶
鉴定菌种做了16srDNA的pcr,体系是预混匀分装的,最后再加入目的基因,试过直接加菌液试过加裂解菌液也试过加提取的基因组,也调过模板浓度,体系全是新拆封的试剂,用到的耗材也全是刚灭过菌的,超净台也用紫外照了半个小时。但就是p不出来,程序p其他的菌没问题,我p其他的菌也没问题,就这一波筛出来的十几个菌,怎么都p不出来,一个条带都没有,反而阴性对照里p出来了。当年百思不解,菌落形态看着是细菌啊,18s好像也做过一次,也没p出来
天一湖医者
这种情况,升高退火至65度,甚至在68度做两步法PCR,或者是将循环数降低,阴性对照可能就没有扩增了。不过这样灵敏度会降低很多,应该不符合lz检测的初衷,建议更换靶基因。
bamboopiggy
如果16 和18 都没有p出来,大概率是你的菌种有问题,实在不行换了吧。
汤姆卜丽波
操作过程没问题的话,你看看是不是试剂有污染?
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