RTPCR实验高浓度的cDNA会对最终结果造成影响么？

模版浓度太高，可能与引物结合不完全，也可能很早就达平台期，看不出差别。一般要求酶和引物是过量的

RNA纯度浓度越高，逆转录得到的cDNA模板质量就越高，1微升用6微升水稀释逆转录应该问题不大，看下管家基因Ct值，在15-20之间数据即可，如果起峰太早，可再稀释一下。

应该不会有影响，趋势是一致的，你看下这篇文章

https://www.yeasen.com/news/detail/537

2-3ug的RNA有点高了，但也能跑，逆转录成cDNA后稀释倍数高一点也可以。

RTPCR实验高浓度的cDNA会对最终结果造成影响。一般试剂说明都有推荐浓度的。最好按试剂说明选取适当的浓度。

因为rtPCR十分灵敏，你调整了RNA浓度后，internal control的CT和目的基因的CT应该都会有所变化。但是，如果你的操作没问题，理想情况下其之间的比值应该是不变的。

建议还是按照标准操作步骤操作吧。1.提取组织RNA时，每50～100mg组织⽤1ml Trizol试剂对组织进⾏裂解；提取细胞RNA时，先离⼼沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复⽤枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转⼊EP管中，在室温15~30C下放臵5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加⼊氯仿，盖上EP管盖⼦，在⼿中⽤⼒震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放臵2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离⼼15分钟；4.取上层⽔相臵于新EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加⼊异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放臵10分钟,12000g（2℃～8℃）离⼼10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%⼄醇进⾏洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离⼼5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下⾃然⼲燥；7.⽤Rnase-free water 溶解RNA沉淀。