Eason老歌迷
PCR反应的关键环节有:模板核酸的制备,引物的质量与特异性,酶的质量及PCR循环条件。寻找原因应针对上述环节进行分析研究。
你看看是不是省去的步骤导致的呢?
汤姆卜丽波
这种情况一般不会是程序上的问题,会不会是试剂出了问题
whilt-shirt
你这个试剂2是什么得说明一下,不同的试剂盒使用说明都不一样
天一湖医者
应该是快速实验过程的程序不对。
未来9
可能有以下几个因素:
1、PCR模板的问题。很多情况下我们提取的DNA浓度纯度虽然很好,但仍然跑不出来,这就有可能是震荡时时间过长,导致DNA变成小片段,所以你会遇到浓度不错,纯度也在1.8以上仍然跑不出来的情况,解决方法就是提取dna时注意不要太剧烈太长时间的震荡,改进你提取DNA的方法,记得最后稀释到10到100ng每微升就好。
2、pcr条件问题。我们一般用的都是别人跑成功的引物,所以我们也会完全参照别人的pcr条件,如果跑不出来就需要确定在你的实验条件下的退火温度,建议跑梯度PCR,两两间隔两度,50~60摄氏度通常是,一次就能测出来最适合的退火温度。
3、跑胶条件。太多的人跑出来的胶要么月牙型,要么牛角型,再要么就是缓冲液不及时换电泳仪不勤洗之类问题,缓冲液建议用了7~8次后就换。
4、再其他的问题就是仪器啊试剂方面的,你再多注意下,心细些就好。
bamboopiggy
可能你样品不适合快速提取。只要有一种方式,做到结果可信。就不要换别的方法了
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