PCR的阶段的作用为什么分这么多阶段 cDNA浓度的范围DNA/RNA比值。

变性、退火、延伸需要不同的温度条件和反应时间所以分阶段进行。

因为pcr不是直接显示的dna的浓度，需要将dna进行扩增以后进行比较，所以分为变性 退火 延申三个阶段。至于cDNA，一般会用500ngRNA，反转为cDNA，为20ul，加水稀释到200ul作为模板来上样。

PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：

1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

3、延伸：DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。

cDNA一般用的最多的是1-100ng/ul（工作浓度）