反转录实验之前如何分析RNA样品符合实验要求？逆转录完成的DNA怎么知道满足做qPCR模板的要求？

1）检测RNA溶液的吸光度

280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。

2）RNA的电泳图谱

一般的，RNA的电泳都是用变性胶进行的，但是根据我的经验，如果你仅仅是为了检测RNA的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的，用普通的琼脂糖胶就可以了。电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰），并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好的。

可以通过超微量蛋白核酸检测仪检测RNA的纯度，也就是260nm吸光度与280nm吸光度的比值来判断，基本上在1.7-2.0之间可以用，另外需要检查RNA的浓度，逆转录的过程中RNA最好能有500ng以上。判断cDNA是否满足要求可以通过普通PCR后跑琼脂糖凝胶电泳的方式

可以通过RNA的电泳图谱

一般的，RNA的电泳都是用变性胶进行的，但是根据我的经验，如果你仅仅是为了检测RNA的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的，用普通的琼脂糖胶就可以了。

电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰），并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好的

这个最简单的就是看你的260/280，260/230的比值要在1.8-2.0之间。调节你的rna的样品浓度差不多，一起反转。反转完，只能跑qPCR以后，看结果，才能知道cDNA的质量如何。