粪便DNA做荧光定量PCR是否一定需要标准菌株？

相关实验：实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

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梅锋

2013-09-05

要做乳酸杆菌及肠球菌的荧光定量，是否需要标准菌株来做参照并制作标准曲线，一定要做绝对定量吗？另外引物是不是要做检测呢？求高人解答，多谢

3 个回答

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helen_gu

2013-09-25

有帮助

做16s吗？可能引物设计比较困难，一般特异性不够，可能会扩出其他的菌

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docwangwen

2013-09-10

有帮助

你是需要做肠道群落分析吗？这样的需要做绝对定量。可以把查找到的上下游引物序列先放到NCBI的Blast里看一下，是不是可以扩增你想要的基因的片段，这一步如果没有问题，就可以合成引物来试一下了。

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苏格兰白草莓

2013-09-07

有帮助

要看你需要达到什么目的了，如果只是做基因表达差异分析的话，就不需要绝对定量之前我有做过乳酸杆菌的荧光定量，没有用标准菌株来做标准曲线，而是直接用的样品DNA。你的引物是要做哪方面的检测呢？个人认为主要是看熔解曲线来确定你的引物有无问题

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