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最后在做链霉亲和素融合蛋白的表达,在纯化脱盐后出现了四聚体,五聚体和多聚体。感觉大部分是多聚体。请问是脱盐部分没有做好?还是有别的什么原因导致的?
土井挞克树
脱盐部分浓度太高会导致蛋白聚化,建议降低浓度
loveliufudan
出现四聚体、五聚体和多聚体的情况可能有多种原因。以下是可能的原因和对应的解决方案:
脱盐不彻底或者蛋白质在低盐浓度下会发生聚集。这种情况下,可以尝试更彻底的脱盐,增加脱盐缓冲液的用量或使用更低的盐浓度。此外,可以尝试在蛋白质表达前加入非离子型表面活性剂,如Tween-20,以预防蛋白质聚集。
蛋白质分子量较大。在分子量较大的情况下,蛋白质容易形成聚集体。此时可以尝试调整蛋白质表达的条件,如降低温度、缩短表达时间等。
pH不当。如果 pH 值不当,蛋白质可能会发生聚集。此时可以尝试调整 pH 值。
高浓度的蛋白质。高浓度的蛋白质也容易形成聚集体。此时可以尝试降低蛋白质浓度,或者加入辅助蛋白质,如BSA。
结构域的存在。如果蛋白质具有结构域,可能会形成多聚体。此时可以尝试对蛋白质进行构造调整,如切除结构域等。
缺失糖基化修饰。如果蛋白质缺少糖基化修饰,可能会影响其稳定性,从而导致多聚体的形成。此时可以尝试添加适当的糖基化修饰。
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