酵母表达纯化

问：酵母经过甲醇时间段诱导后，再进行离心，取得的上清就是蛋白吗？还需要过NI柱子吗？需要破碎吗？谢谢大家指导，本人对酵母的表达和纯化一点也不晓得，只做过真核和原的表达与纯化，现在就是不晓得酵母的纯化与一般真核（可溶性表达产物）的纯化是不是一样的，谢谢大家，我酵母阳性重组子已筛选出来，下一步就得做诱导了，但对酵母表达纯化一点也不晓得，烦啊

答1：若是分泌型蛋白,蛋白应在上清中,采用什么柱与你的蛋白标签有关,不需要要破碎.

答2：我不清楚你所说的阳性克隆子已经筛选出来，是指什么？是PCR鉴定出了你的目的基因呢，还只是在RDB或MD或G418平板上筛选出来的克隆呢？如果是做到这一步，你可以参照Invitrogen的毕赤酵母表达手册上的方法进行诱导表达。直接从平板上多挑克隆，用MGY或BMGY培养基培养，再用BMMY培养基诱导表达，SDS－PAGE检测目的蛋白是否表达，同时选择高表达株，同时用western-blotting鉴定是否你的目的蛋白就行了。