有人做LCR扩增吗？请教～

首先配制琼脂糖凝胶的时候要充分煮沸和混匀，然后跑胶的时候电压不要太高，100-120v电泳20-30min差不多了

Maker不清晰可能有以下几个原因：

1. 错误的染色条件：蛋白胶染色时需要严格控制染色时间、染色剂的浓度和温度等条件。如果这些条件控制不好，就可能导致染色不均匀或者过度染色等问题，进而影响到Maker的清晰度。

2. 胶的固定不充分：蛋白胶染色前需要进行胶的固定，以避免染色过程中胶脱离或变形等现象。如果固定不充分，也会对Maker的清晰度产生影响。

3. 洗涤次数不够：在蛋白胶染色过程中，洗涤次数非常重要。如果洗涤不彻底，残留的染色剂会干扰Maker的解读。

4. 胶的质量问题：如果胶的制备过程存在问题，例如胶的pH值不合适，都会影响到Maker的清晰度。

marker这么模糊一般首先考虑引物的原因，引物可能裂解了或者断裂了

建议您从以下方面排查：

检查反应温度是否稳定，是否达到PCR反应所需的最佳温度。

确认引物的浓度是否正确，引物的质量是否纯净，是否存在污染。

确认PCR反应体系中酶的浓度是否足够，是否过多或过少。

检查DNA模板的质量和浓度，可能存在DNA质量差或者浓度低的情况。

如果您的PCR产物存在多个尺寸的DNA片段，尝试优化反应条件，或者设计新的引物或者使用高保真酶。