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cDNA不同稀释度,溶解曲线差异很大是怎么回事?

相关实验:DNA 序列分析技术

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能唱歌的车厘子

图1里cDNA是3倍稀释的,溶解曲线很好;图2的cDNA是2倍稀释,后面出现了杂峰。有大佬们指点下么?

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4 个回答

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huarenqiang5

有帮助

可能原因是:

1、引物设计不够优化

2、引物浓度不佳

3、镁离子浓度过高

4、模板有基因组的污染

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土井挞克树

有帮助

二倍稀释后出现双峰是正常的可以重复三次实验,如果都是同一结果那么就可以用。

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juyue2010

有帮助

可能是cDNA中含有的反转录成分太高,对qPCR造成影响

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Dr_劉医生

有帮助

这是正常的,cDNA的稀释浓度不同,基因扩增的循环次数不同,成指数级增长,所以当3倍变成2倍,达到引物模板ct值就快,循环次数就会少,导致出现杂峰。

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