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RNA提取液(25:24:1,PH<5.0)的提取效果及使用方法

相关实验:核酸提取

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2 个回答

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Eason老歌迷

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rna提取液的提取效果很好,具体使用方法和trizol法差不多。苯酚使蛋白质变性,同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相与液相分层,去除核由于苯酚与水有一定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱和酚中含10%左右的水分),因此不会丢失样品。但由于仍然会有少数酚进入水相,抑制后续反应。氯仿的作用是让水和酚彻底分开,不互溶,彻底去除水相中的残留苯酚。异戊醇的作用是降低表面张力,从而减少操作过程(常常有震荡步骤)中气泡的产生,而这些气泡的表面张力可能会使DNA断裂。另外,异戊醇还有助于水相和酚相分相,使离心后的上层水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定,便于移取上清。

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bamboopiggy

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酚-氯仿-异戊醇的25:24:1 的混合液,用于RNA 提取时去除蛋白质、多糖、脂类和酚类等杂质

酚使蛋白质变性,同时抑制了 RNase 的降解作用。氯仿抽提加速有机相 与液相分层,去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇减少蛋白质变性操作过程中产生 的气泡。使用酚:氯仿:异戊醇抽提离心后的上层为含 RNA 的水相、中间为变 性蛋白与 DNA,下层为有机溶剂相。 由于苯酚与水有一定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会 进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续 酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱 和酚中含 10%左右的水分),因此不会丢失样品。但由于仍然会有少数酚进入水 相,抑制后续反应。 氯仿的作用是让水和酚彻底分开,不互溶,彻底去除水相中的残留苯酚。 异戊醇的作用是降低表面张力,从而减少操作过程(常常有震荡步骤)中气 泡的产生,而这些气泡的表面张力可能会使 DNA 断裂。另外,异戊醇还有助于 水相和酚相分相,使离心后的上层水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维 持稳定,便于移取上清。

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