怎么对snp位点引入酶切位点，该点所在序列没有对应的酶切位点怎么办

重组时选择你的目的基因上没有，而质粒的多克隆位点上有的酶切位点，一般重组质粒需要两个酶，所以你要选择两个酶切位点，注意尽量避免使用切出平末端的酶。重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序，这个不能错，不然序列就会接反。一般设计重组引物的时候，在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列，在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点，酶切位点加好后，注意5’端还需要加上保护碱基，这个具体你可以去查下内切酶的说明书。然后你要注意，根据你的载体需要，是否要在引物上带上启动子和终止子

可以用pcr先对已有酶切位点酶切，然后设计引物含有所需酶切位点，通过pcr扩增上去

首先，可以通过Snap查看目的片段中包含的酶切位点，在插入质粒时，通常选择目的片段中不含有的单一酶切位点，一般选择常见的即可。位点选择可根据各种酶的效能和适用buffer进行筛选。

巢式PCR-RFLP (derived cleaved amplified polymorphic sequences,dCAPS)是对PCR-RFLP的一种改进, 通过在SNP位点周围引入错配, 使SNP位点处形成内切酶识别位点, 经由酶切从而达到分型的目的。但错配碱基必须位于引物上。