SSR分子标记如何定位基因

简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n。主要通过微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守，可设计双引物进行PCR扩增，揭示其多态性。

在真核生物的基因组中，每个SSR序列的基本单元重复次数在不同基因型间差异很大，因此形成其座位的多态性，并且每个SSR座位两端有一段保守的DNA序列。

可以根据此保守序列设计引物，利用PCR技术进行扩增，然后用高浓度琼脂糖凝胶或变性聚丙稀酰胺凝胶电泳进行分析。由于SSR多态性是由简单序列重复次数的差异引起的。

因此在扩增的PCR带上会出现小片段或不连续的带。由此可见，SSR分子标记的基本原理就是要了解SSR座位两侧的核苷酸序列，寻找其中的特异保护区。

SSR标记又称为sequence tagged microsatellite site,简写为STMS，是目前最常用的微卫星标记之一。由于基因组中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DNA片段克隆、测序，然后根据微卫星的侧翼序列就可以人工合成引物进行PCR扩增，从而将单个微卫星位点扩增出来。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性，这一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP)，每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。由于SSR重复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP高得多的多态性，这就是SSR标记的原理。