感受态制备不出来是为什么？

做大肠杆菌蛋白表达试验中，感受态的制备主要与以下几个因素有关： 1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）； 2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行； 3．经 CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加， 24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）； 4．化合物及无机离子的影响：在 Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如 Mn2+或 Co2+）、 DMSO 或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高,一般来讲 CaCl2 /CoCl2法及二甲基亚砜(DMSO)等可以提高转化率很多倍(100-1000)； 5．所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的 DNA ；

1、你可以买一组高效感受态试试，如果好的，那就说明你的感受态有问题。2、把你做的感受态给其他人用用，最好是师兄师姐，如果他们能做出来，你做不出来，那就是你的操作问题。3、感受态制备，建议用氯化钙法，很好用。也比较简单。制备的时候，要点是：动作要很轻柔，做完以后也试试看，做个空白对照。