流式检测血小板活化实验方法和步骤。

血小板活化检测靶点：CD41 或 CD61，CD62p，CD63；

血小板活化检测标本：柠檬酸钠抗凝全血；

推荐抗体组合

管号 FITC PE

1 Mouse IgG1 Mouse IgG1

2 CD41或CD61 CD62p

3 CD41或CD61 CD63

检测步骤

抽取静脉血 2 mL，柠檬酸钠抗凝。血液采集后 1 小时内进行实验；

注：抽血时尽量不要用止血带，以免引起人为活化。

<在流式管内加入 100 uL PBS 和 5 uL 抗凝血；/li>

加入适量的抗体和同型对照；

室温、避光染色 15 分钟；

加入 1 mL PBS，上机检测。

结果判断

正常人：血小板(CD41 或 CD61 阳性群)的 CD62p 和 CD63 表达率均在 5%以内。

血小板活性增强者：血小板(CD41 或 CD61 阳性群)的 CD62p 和 CD63 表达率均超过 5%。

1.采血10分钟内,用移液管将50 μL ADP溶液移至12 × 75毫米的试管中。

2.加入0.45 mL全血。轻轻地旋转搅拌。

3.室温(20°C至25°C)孵育2分钟。

4.立即染色或固定。 固定 染色前用多聚甲醛固定血液可抑制血小板自发激活。

下面是流式检测血小板活化实验的一般步骤和方法：

1. 准备样品：采集血液样本，离心去除红细胞，得到血浆。如果需要，可以从血浆中分离血小板。

2. 表面标记：使用特定的抗体（如CD62P、CD63、CD69等）对血小板进行表面标记。这些抗体可以识别活化血小板上的特异性抗原，通过荧光标记抗体，可以让流式细胞仪检测到它们。

3. 染色：如果需要检测血小板的形态，可以采用染料（如Rhodamine 113）染色。这可以帮助区分不同阶段的活化血小板。

4. 数据收集：使用流式细胞仪收集数据。流式细胞仪可以测量荧光强度和形态特征，从而计算出不同活化状态的血小板的百分比。

5. 数据分析：分析收集到的数据。根据荧光强度和形态特征，可以确定活化血小板的百分比。此外，还可以分析不同活化状态的血小板的分布和数量。

6. 结果解释：根据实验目的和数据分析结果，解释实验结果。例如，可以确定活化血小板的百分比，研究不同刺激物对血小板活化的影响，或评估特定疾病中血小板活化的异常。