血小板活化检测方法

1． 临床意义

心肌梗塞、脑血管血栓形成、深静脉血栓形成、脑栓塞和肺栓塞等血栓性疾病在中国有很高的发病率，也是致死的重要原因。血小板活化是血栓形成的重要环节，检测血小板的活化状态可辅助诊断和监控血栓性疾病，对判断血栓前状态意义也非常重大。

2． 检测原理

静止状态的血小板内分布着多种颗粒，如a颗粒、溶酶体颗粒等。这些颗粒表面存在着一些特定蛋白，如a颗粒表面有CD62p抗原，溶酶体颗粒表面有CD63抗原。血小板活化时，由于颗粒膜蛋白与血小板膜蛋白相互融合，使颗粒膜蛋白翻转到血小板膜表面。因此，可通过检测这些颗粒膜蛋白来判断血小板的活化状态。

3. 采血

EDTA抗凝采血，取后段血。因前段血中可能有组织液存在，造成人为血小板活化。

4. 试剂 选择

FITC标记的CD42b抗体
PE标记的CD62p或CD63抗体
在血小板膜表面稳定表达的抗原有CD41/CD61(GPIIb/IIIa)和CD42a, CD42b等，这些抗原均可作为血小板的标志。但因中国存在着一部分血小板无力症患者，其血小板表面缺乏CD41/CD61(GPIIb/IIIa)。因此，一般使用CD42b来鉴别血小板。
因一般情况下，CD62p和CD63的表达率均较低，需用PE等荧光较强的荧光素标记检测。

5. 染色

a. 全血法：

1) 取 试管 A(阴性对照)和 试管 B(测定管)，均加入5ml 抗凝全血和200ml PBS
2) A管中加入适量的CD42b-FITC和阴性对照抗体(对应于CD62-PE或CD63-PE)
B管中加入适量的CD42b-FITC和CD62-PE或CD63-PE抗体
3) 室温，避光孵育25分钟
4) 加2 ml PBS，上机检测
血小板在体外随着时间的延长会自发活化，所以由采血到检测一般要在3小时内完成。