请问肺结节小鼠模型怎么建立？

方法:

1 细胞培养及处理

将小鼠Lewis肺癌细胞置于含10%胎牛血清及高糖DMEM的完全培养基中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每1～2d更换培养液1次，每3 d用0.25%胰酶消化传代一次。细胞汇合率达90%时(如图2)，收集细胞，离心去上清，加入PBS吹打，使细胞悬浮于PBS中，台盼蓝染色细胞活力测定大于95%，并进行细胞计数，调整细胞浓度为4×107/mL的细胞悬液备用。

2 注射前Matrigel的准备

Matrigel置于-20℃长期保存，用时将其置于冰浴放入4℃冰箱中过夜融化，将已融化的Matrigel和4×107/mL浓度的细胞悬液按1∶1混匀，这一操作在冰浴中进行。

3 肺结节动物模型的建立

①分组：小鼠共30只，其中25只用于观察肿瘤的生长情况，分别在术后的第4、7、10、13、16天各处死小鼠5只，另外5只用于生存曲线的测定。②麻醉：水合氯醛溶液10 mg/mL，按0.05 mL/10 g体重剂量对小鼠进行麻醉。

③接种：将小鼠麻醉后，右侧卧位置于操作台上，对小鼠腋下剪毛并用乙醇消毒，在左腋前线肋弓上约1.5 cm处作一个5 mm大小的切口，分离皮肤及皮下组织，暴露胸壁，至能看到肺叶随呼吸上下活动为止，将50 μL混有Matrigel的细胞悬液用微量进样器在室温下放置2min后，再注射至左肺上，进针深度约3 mm，注射后停针数秒，拔针后缝合切口。

3 病理学检测

留取小鼠肺脏、肿瘤、肝脏、肾脏、脾脏行病理检测，病理HE染色按常规制备病理切片，二甲苯Ⅰ10 min，二甲苯Ⅱ20 min，100%乙醇5 min，95%及85%乙醇各1 min，自来水冲洗片刻，苏木素染色10 min，自来水冲洗15 min，0.5%伊红染色1 min，自来水冲洗，95%乙醇片刻，100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各10 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min，中性树脂胶封片，显微镜下观察小鼠结节。

肺结节小鼠模型的建立通常涉及以下步骤：

1. 小鼠选择：选择合适的小鼠品系和性别作为模型动物。根据研究目的和疾病特点，选择易感或易患肺结节的小鼠品系。

2. 肺结节诱导：根据您的研究目的，可以使用不同的方法诱导肺结节形成。常见的方法包括以下几种：

• 化学诱导：使用化学物质（如致癌物质）或药物（如脱氧胆酸）诱导肺结节形成。这些物质可能需要通过胸腔注射、喂食或吸入等方式给予小鼠。

• 基因突变：使用基因工程技术制备特定基因突变的小鼠模型，这些突变可能与肺结节的发展和进展有关。

• 移植瘤模型：通过移植肺结节相关的肿瘤细胞或肿瘤片段到小鼠体内来建立肺结节模型。

3. 观察和评估：在适当的时间点，对小鼠进行观察和评估肺结节的形成和发展。这可以通过活体成像技术、组织切片、免疫组化等方法进行。