温君华
类器官培养起来好麻烦的感觉,要疯掉了,请问战友们,有相关培养经验的,赐教一下宝贵经验,谢谢!!!
毛利小五郎的徒弟
类器官可以使用琼胶培养基,在化学小分子抑制剂/激活剂、细胞因子、培养基添加剂等物质作用下经过培养得到的相应器官类似的组织结构。
你好几和户
吸出上清液,将沉淀重悬在 BME(推荐 R&D Systems® Cultrex RGF,货号 3536-005-02、BME001-10)中。BME 应置于冰上,以防止其凝固,因而操作时应当迅速。BME 的用量取决于沉淀的量。大约 10,000 个细胞应接种在 40 μL BME 中。切勿过度稀释 BME【BME 应当 > 70%(体积比)】,以确保能形成固化液滴。将类器官和 BME 的混合物滴在预热的 24 孔悬浮细胞培养板的底部,每滴约 10 μL。在每孔中放置 3~4 滴(BME 包被方法请点击了解)。 类器官一旦悬浮在 BME 中,应尽快进行铺板,因为 BME 可能在管中或移液器吸头中凝固。培养板应置于 37℃ 的加湿培养箱中,预热过夜。如果未正确预热,BME 液滴会立即平铺在培养板的表面,并且类器官更容易附着在培养板的底部。将培养板置于 37°C、5%(体积比)CO2 加湿培养箱内,孵育 20~30 分钟,使 BME 凝固。准备所需量的类器官培养基(培养基配方请见下表),并添加 10 μM ROCK 抑制剂和原代细胞抗生素 Primocin(100 μg/mL),然后将培养基置于 37°C 水浴中。对于头颈部类器官,在人头颈部类器官培养基中额外添加 0.5 μg/mL 卡泊芬净。