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单克隆抗体的制备介绍

体内免疫法很难获得单克隆抗体。如能将所需要的抗体形成细胞选出并能在体外进行培养即可获得已知特异的单克隆抗体。1975年德国学者Kohler和英国学者Milstein将小鼠骨髓瘤细胞和经绵羊红细胞,免疫的小鼠脾细胞在体外进行两种细胞融合,结果发现部分形成的杂交细胞既能继续在体外培养条件下生长繁殖又能分泌抗SRBC抗体,称这种杂交细胞系为杂交瘤。这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞能大量无限生长繁殖的特性,又具有 ...

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异种抗原的分类

与宿主不是同一种属的抗原物质称为异种抗原。通常情况下,异种抗原的免疫原性比较强,容易引起较强的免疫应答。与医学有关的异种抗原主要有以下几类: 1.病原微生物:如细菌、病毒和其他微生物都是良好的抗原。这些微生物的个体结构虽然简单,但抗原结构却很复杂,是多种抗原的复合体。它们在引起宿主感染的同时,也会诱导宿主产生特异性免疫应答和抗感染能力。因此可用免疫学方法对传染病进行诊断和防治。 2.细菌外毒素和类毒素:它们都是很好的抗原, ...

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特性和诱导免疫应答的性能

根据抗原被淋巴细胞识别的特性和诱导免疫应答的性能,可将抗原分成以下三类: (一)胸腺依赖性抗原含有T细胞表位、需要T细胞参与才能诱导免疫应答的抗原称为胸腺依赖性抗原。TD-Ag可诱导细胞介导免疫和(或)抗免疫应答,但无一例外地需要T细胞的参与。天然抗原的绝大多数都是TD-Ag. (二)胸腺非依赖抗原 只含B细胞表位、可直接激活B细胞的抗原称为胸腺非依赖性抗原。TI-Ag的分子结构比较简单,往往是单一表位规律而密集地重复排列。这 ...

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自身抗原简介

能诱导宿主发生自身应答的物质称为自身抗原。正常情况下免疫系统对自身物质不作为抗原来对待,但当机体受到外伤或感染等刺激时,就会使隐蔽的自身抗原暴露或改变自身的抗原结构,医|学教育网搜集整理或者免疫系统本身发生异常,这些情况均可使免疫系统将自身物质当作抗原性异物来识别,诱发自身免疫应答,引起自身免疫病。

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间接凝集反应的作用

间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点,而且能用于抗原或抗体的测定,因此在临床检验中广为应用。(一)抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原,也可用于检测各种蛋白质成分。间接凝集反应的敏感度虽较沉淀反应高,但低于新发展的各种标记免疫测定。因此在微量抗原测定中其实用性取决于临床的要求。例如测定尿液HGG的胶乳凝集妊娠试验,直接凝集法的敏感度约为300mIU/ml,凝集抑制法的敏感 ...

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胶乳凝集试验的简介

胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验,所用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳,是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒,带有负电荷,可物理性吸附蛋白分子,但这种结合牢固性差。也可制备成具有化学活性基团的颗粒,如带有羧基的羧化聚苯乙烯胶乳等,抗原或抗体以共价键交联在胶乳表面。化学交联一般通过缩合剂碳化二亚胺将胶乳上的羧基与被交联物上的氨基缩合在一起。这种用交联致敏的胶乳试剂性能稳定,保存期长。胶乳凝集试验分试管法与玻片法医学|教 ...

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间接血凝试验的简介

血凝试验(hemagglutinationtest)是红细胞凝集试验的简称。间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验,在临床检验中应用广泛,以下简述其操作过程。(一)载体 红细胞是大小均一的载体颗粒,最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。新鲜红细胞能吸附多糖类抗原,但吸附蛋白质抗原或抗体的能力较差。致敏的新鲜红细胞保存时间短,且易变脆、溶血和污染,只能使用2~3天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化,可长期保存 ...

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凝集反应的发生阶段

细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后,可出现肉眼可见的凝集(agglutination)现象。早在1896年,Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象,有效地诊断伤寒病。至1900年Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型,并于1930年获得了诺贝尔奖金。凝集试验灵敏度高,方法简便,迄今已成为通用的免疫学试验,广泛应用于临床检验。凝集反应的发生分两阶段:①抗原抗体的 ...

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直接凝集反应试验

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集,称为直接凝集反应(direct agglutination)。凝集反应中的抗原称为凝集原(agglutinogen),抗全称为凝集素(agglutinin)。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。(一)玻片凝集试验 玻片凝集试验为定性试验方法,一般用已知抗体作为诊断血清、与受检颗粒抗原如菌液或红细胞悬液各加一滴在玻片上,混匀,数分钟后即可用肉眼观 ...

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絮状沉淀试验要点

絮状沉淀试验为历史较久,又较有用的方法。该法要点是:将抗原与抗体溶液混合在一起,在电解质存在下,抗原与抗体结合,形成絮状沉淀物。这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响,因而产生了两种最适比例的基本测定方法医学|教育网搜集整理。

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单克隆抗体在医学中的应用

单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是亲和层析中重要的配体,是免疫组化中主要的抗体,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势。单克隆抗体的特异性强,可将抗原抗体反应的特异性大大提高,减少了可能的交叉反应,使试验结果可信度更大。单克隆抗体的均一性和生物活性单一性使抗原抗体反应结果便于质量控制,利于标准化和规范化。目前已有许多检验试剂盒用单抗 ...

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抗血清中抗体的纯化

单价特异性是指血清只与其特异性抗原发生反应。有时免疫原不纯,含有微量的杂抗原(性质相近的),制得的抗血清中出现2~3种杂抗体。即使用纯抗原,例如用高度纯化的IgG免疫动物,出现的抗体总是有抗γ重链的抗体,也有抗κ轻链和抗λ轻链的抗体。还有一种情况,有些蛋白质和其他蛋白质处于一种结合状态,如甲胎蛋白常和白蛋白相结合,因此免疫得到的抗血清总是有抗白蛋白杂抗体存在。一、除去杂抗体有两种方法: 1.亲和层析法将交叉杂抗原交联到 ...

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免疫原的制备佐剂介绍

为了促进抗体产生,可在注射抗原的同时,加入一种辅助剂,这种辅助剂称为佐剂。佐剂本身可以有免疫原性,也可不具备免疫原性。常用的有免疫原性的佐剂有百日咳杆菌、革兰阴性杆菌的内毒素和抗酸杆菌(包括结核分枝杆菌和枯草分枝杆菌)等;非抗原性的佐剂有铝乳、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、藻酸钙、聚核苷酸、胞壁肽等。应用最多的是福氏(Freund)佐剂,是用石蜡油、羊毛脂和卡介苗混合而成。佐剂的作用机制极为复杂。在佐剂-抗原的注射 ...

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颗粒性抗原的制备介绍

免疫原是诱导机体产生抗体、并能与抗体发生反应的物质。能否制得合格的抗体由许多因素决定,而能否制备合格的免疫原则是其前提条件。而且作为诊断试剂的抗原也必须是单一特异性的,即纯化的抗原。自然众多的物质皆可成为免疫原,但绝少是单一成分(除非是合成的基因工程制备的),所以必须将某个抗原从复杂的组分中提取出单一的成分。下面介绍有代表性的免疫原制备方法。颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。最常用的细胞抗 ...

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抗原抗体反应原理和特点

  抗原抗体反应原理和特点:  原理  1)抗原决定簇与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性;  2)抗原决定簇与抗体超变区的沟槽分子表面的结合;  3)抗原表位与抗体超变区必须紧密接触,才可能又足够的结合力。  特点  1)特异性:抗原分子只能与由它刺激所产生的抗体结合而起反应的专一性能;  2)可逆性:是指Ag与相应Ab结合成IC后,在一定条件下可解离为游离抗原与抗体。 3)阶段性: 第一阶段:特异性结合阶段 (①反应速度快,几秒钟或几分钟即可完成 ②不出现肉眼可见反应); 第二 ...

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佐剂的作用机制

  佐剂的作用机制:  1)改变抗原物理性状,延缓其降解和排除,更有效刺激免疫系统;  2)刺激单核-吞噬细胞系统,增强其处理和提呈抗原的能力;  3)医学|教育网搜集整理刺激淋巴细胞增殖和分化。

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单向扩散实验的影响因素

  单向扩散实验的影响因素: 1)抗血清不但要求亲和力强、特异性好喝效价高,还应注意存放的方法,放置效价下降;  2)标准曲线必须在每次测定时同时制作,每次测定还须带指控血清,以保证定量准确性;  3)单向扩散实验时,有时会出现结果与真实含量不符,主要发生在Ig测定中,如用单克隆抗体测定正常人多态性抗原,则抗体相对过剩,使沉淀环直径变小,测量值降低,反之如用多克隆抗体测定单克隆病(M蛋白),则抗原相对过剩(单一抗原决定簇),沉淀环呈不相关扩 ...

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酶免疫技术

  酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原,此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性医学教育|网整理搜集,同时又保留了酶对底物的催化活性。

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什么是免疫组织化学技术

  免疫组织化学技术:又称免疫细胞化学技术,是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应医学教育|网搜集整理,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。

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组织切片的优缺点

  组织切片的优缺点:  1)冷冻切片: 优点是操作简单,组织的抗原性保存好,自发荧光较少,特异荧光强,同时适用于不稳定的抗原,缺点是组织结构欠清晰;  2)石蜡切片: 优点是组织细胞的精细结构显现清楚医学|教育网搜集整理,缺点是对抗原的保存量不如冷冻切片,并有组织自发荧光和非特异性荧光,需加酶消化处理。

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