相关专题 液相色谱和气相色谱技术 高效液相色谱的固定相和流动相 一、固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～1.0×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 1. 表面多孔型固定相 它的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化硅、离子交换剂、分子 筛、聚酰胺等。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高;颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达到平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受到限制。 2. 全多孔型固定相 由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成。这类固定相由于颗 粒很细(5～10µ

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 配件 典型的配件由螺丝和卡套组成——分别为连接和密封管子而设计。尽管功能简单，描述和使用它们却有些复杂。要确切描述一个配件，需要考虑以下几件事情：接收孔的形状(锥孔或平低孔);适用什么尺寸的管子;螺丝的螺纹，如10·32、1/4·28等。配件也可由度量单位分类或由材料类型分类。 不锈钢配件 不锈钢配件在使用中和设备中虽然受到限制，但它们仍然是许多分析型设备中最通用的配件，这是因为它们能够承受高压，而且对大多数溶剂都具有兼容性。 不锈钢配件的尺寸和形状非常多样，并常因生产商的不同而不同(见图1和图2)。因此，为了保证配件的正确使用和寿命，最好使用为特定厂商的孔径设计的配件。 不锈钢配件必须与管子抱在一起(或永久相连)。我们向您推荐以下处理步骤： 首先将螺丝与卡套按顺序装在管子上，然后与相匹配的孔径相连，用手旋紧螺丝，同时保证管子已经伸到孔径底部。最后用扳手再旋转3/4扣。请注意：现在卡套已被永久固定在管子上了，并且只能在它被抱紧的孔径中使用。错误的使用会导

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 (一)保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱; 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱; 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液; 4.柱污染 每天冲洗柱; 5.柱内条件变化 稳定进样条件，调节流动相; 6.柱快达到寿命 采用保护柱。 (二)保留时间缩短 1.流速增加 检查泵，重新设定流速; 2.样品超载 降低样品量; 3.键合相流失 流动相PH值保持在3～7.5检查柱的方向; 4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀; 5.温度增加 柱恒温。 (三)保留时间延长 1.流速下降 管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡; 2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱; 3.键合相流失 同前(二)3; 4.流动相组成变化 同前(二)4; 5.温度降低 同前(二)5。 (四)出现肩峰或分叉

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出;又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名;后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱 法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱 理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 一、高效液相色谱仪 的结构： HPLC的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样。典型的高效液相色谱仪 结构和流程可用下列方框图表示(图3-2)。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 1 、高压泵 HPLC使用的色谱柱是很细的(1～6mm)，所用固定相的粒度也非常小(几μm到几十μm)，所以流动相在柱中流动受到的阻力很大，在常压下，流动相流速十分缓慢，柱效低且费时。为了达到快速、高效分离，必须给流动相施加很大的压力，以加快其在柱中的流动速度。为此，须用高压泵进行高压输液。高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 HPLC使用的高压泵应满足下列条件： a 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围(一般为1～10ml/min); b 能抗溶剂腐蚀; c 有较高的输液压力;对一般分离，60×105Pa的压力就满足了，

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 气相色谱 工作原理：是利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同， 因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 一、气相色谱 的简要介绍 气相色谱 法是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱的“气”字指流动相是气体，“固”字指固定相是固体物质。例如活性炭、硅胶等。气液色谱的“气”字指流动相是气体，“液”字指固定相是液体。例如在惰性材料硅藻土涂上一层角鲨烷，可以分离、测定纯乙烯中的微量甲烷、乙炔、丙烯、丙烷等杂质。 二、气相色谱 法的特点 气相色谱 法是指用气体作为流动相的色谱法。由于样品在气相中传递速度快，

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。 正确的安装请参考以下步骤： 步骤1、检查气体过滤器 、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。 步骤2、将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平。 步骤3、将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。通常来说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1～2cm，这就是较为理想的状态(具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册)。避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。将色谱柱正确插入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后(用手拧不动了)用扳手再多拧1/4～1/2圈，保证安装的密封程度。因为不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 一、 气相色谱 法有哪些特点? 答：气相色谱 是色谱中的一种，就是用气体做为流动相的色谱法，在分离分析方面，具有如下一些特点： 1、高灵敏度：可检出10-10克的物质，可作超纯气体、高分子 单体的痕迹量杂质分析和空气中微量毒物的分析。 2、高选择性：可有效地分离性质极为相近的各种同分异构体和各种同位素。 3、高效能：可把组分复杂的样品分离成单组分。 4、速度快：一般分析、只需几分钟即可完成，有利于指导和控制生产。 5、应用范围广：即可分析低含量的气、液体，亦可分析高含量的气、液体，可不受组分含量的限制。 6、所需试样量少：一般气体样用几毫升，液体样用几微升或几十微升。 7、设备和操作比较简单仪器价格便宜。 二、气相色谱 的分离原理为何? 答：气相色谱 是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 1)气相色谱仪 原理 气相色谱 是对气体物质或可以在一定温度下转化为气体的物质进行检测分析。由于物质的物性不同，其试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同， 虽然载气流速相同，各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定时间的流动后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 根据出峰位置，确定组分的名称，根据峰面积确定浓度大小。 2)气相色谱仪 操作基础 对一个混合试样成功地分离，是气相色谱 法完成定性及定量分析的前提和基础。衡量气相色谱分离好坏的程度可用分离度R表示。而其中气相色谱分离条件的选择至为关键。主要涉及以下几个方面： 2.1)载气对柱效的影响 载气对柱效的影响主要表现在组分在载气中的扩散系数Dm(g)上，它与载气分子 量的平方根成反比，即同一组分在分子量较大的载气中有较小的Dm(

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 一、进样应注意问题 ： 手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡(吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器 金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，(指10ul注射器，带芯子注射器平感觉)进样速度要快(但不易特快)，每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。 二、安装色谱柱 ： 1. 安装拆卸色谱柱必须在常温下。 2. 填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片(岛津色谱是垫片密封)。 3. 色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。 4. 毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。 三、

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 (一)基本原理 混合样品的气流通过固定相时，根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。 利用气相色谱 层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强，能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点，常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期诊断。其结果稳定，重复性好，但不足之处是操作中各因素不易控制，方法不易标化等。 (二)气相色谱仪 的基本部件 1. 载气 常用的载气主要有氮、氩、氢和二氧化碳等。这些气体一般都由高压气瓶供给。 2. 进样器 气相色谱仪 可以用于分离固相、气相和液相标本。液相标本采用微升注射器穿过橡皮隔片注入，气相标本采用特种气相注射器注入。 3. 谱柱及加热炉 色谱柱一般由金属或玻璃制成，通常采用的柱长2m~4m，内径2mm,毛细管柱长度可达20m～150m，内径为0.2mm。 载体 一般采用惰性、多孔的固体颗粒。多由硅藻土或玻璃珠制成，分析不同极性的微生物化合物，为了获得最适的分离条件，要

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 1、 仪器方面的最新进展 自动化程度进一步提高，特别是EPC(电子程序压力流量控制系统)技术已作为基本配置在许多厂家的气相色谱仪 上安装(如HP6890，Shimadzu GC-17A GC-2010， Varian 3800，PE Auto XL，CE Mega 8000等)，从而为色谱条件的再现、优化和自动化提供了更可靠更完善的支持。 _与应用结合更紧密的专用色谱仪 ，如天然气分析仪等。 _色谱仪 器上的许多功能进一步得到开发和改进，如大体积进样技术，液体样品的进样量可达500微升;检测器也不断改进，灵敏度进一步提高;与功能日益强大的工作站 相配合，色谱采样速率显著提高，最高已达到200赫兹，这为快速色谱分析提供了保证。 _色谱工作站功能不断增大，通讯方式紧跟时代步伐，已实现网络化，从技术上讲，现在实现气相色谱仪 的远程操作(样品已置于自动进样器中)是没有问题的。 _新的选择性检测器得到应用，如AED、O-FID、SCD、PFPD等。

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法。根据固定相的状态不同，又可将其分为气固色谱和气液色谱。气固色谱是用多孔性固体为固定相，分离的主要对象是一些永久性的气体和低沸点的化合物。但由于气固色谱可供选择的固定相种类甚少，分离的对象不多，且色谱峰容易产生拖尾，因此实际应用较少。气相色谱多用高沸点的有机化合物涂渍在惰性载体 上作为固定相，一般只要在450℃以下有1.5KPa-10KPa的蒸汽压且热稳定性好的有机及无机化合物都可用气液色谱分离。由于在气液色谱中可供选择的固定液种类很多，容易得到好的选择性，所以气液色谱有广泛的实用价值。 第一节 气相色谱仪 (一)气相色谱 流程 气相色谱 法用于分离分析样品的基本过程如下图： 热导池气相色谱 流程示意图 1.高压钢瓶，2.经减压阀,3、净化器.4、流量调节器.5.压力表，6.转子流速计，7.检测器，8.气化室，9.色谱柱，10.测量电桥，11.记录器最。 气化室与进样口相接，它的作用是把从进样口注

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相关专题 液相色谱和气相色谱技术 要保持泵的良好操作性能，必须持续保持系统的清洁，确保使用的溶剂和试剂的质量，流动相进入流路前必须进行过滤和脱气。 预防泵故障需要持久不间断的努力： 1)、使用优质试剂和HPLC级溶剂，对泵对色谱柱都有好处; 2)、流动相和溶剂在使用前使用优质材料过滤; 3)、对流动相和溶剂进处理脱气; 4)、每次开始使用时要排气放空，工作结束后从泵及色谱柱中洗去缓冲液或有害物;不让水及腐蚀性溶剂等有害物质滞留泵及色谱柱中; 5)、定期更换在线过滤圈等垫圈; 6)、严格遵从泵操作手册中的建议。 处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳;保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。 为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀(入口与出口)、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 问：哪个公司的色谱柱好? chromexpert： 色谱柱从大的分有气相用、液相用、毛细管电泳柱等。 气相柱：气相柱又分为填充柱和毛细管柱。 进口柱主要有：Agilent、J&W等，种类众多、价格较贵。 国产柱：兰州化物所，北大化学系研制的色谱柱性能较好。 国产柱已完全能与进口柱媲美。 液相柱：进口柱：agilent、waters、岛津等，价格较贵。waters的口碑最好。 国产柱：大连依立特，北京迪马，价格便宜。 作为一般常用的C18柱，国产柱子都能满足要求，柱寿命也较长。 如要进行高pH的操作，最好购买进口柱。 毛细管电泳：为一般科研用，购买河北永年光纤厂的空心柱就可以了。 hjl_942： 1、液相色谱柱品牌： Waters、岛津、Agilent、HP、PE、Varian、SSI、Beckman、Allteck、Kromasil、Hitech、SP、Bio-Rad、吉尔森(法)、大连依利

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪 上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装(不加预柱) 1.将卡套架套入柱芯; 2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套; 3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片; 4.将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧; 5.然后依同样的顺序连接好柱子的另一端; 6.连接到液相色谱仪 ，PEEK接头手拧即可;若为不锈钢接头应使用专用扳手。 注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装(加预柱) 1.将卡套架套入柱芯; 2.将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯; 3.将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片; 4.将“子弹头”预柱放入卡套片内;

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 1.HPLC的日常操作条件： 温度：10～30℃;相对湿度<80%;最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 2.泵的保养： 1)使用流动相尽量要清洁; 2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗; 3)流动相交换时要防止沉淀; 4)避免泵内堵塞或有气泡。 3.进样器的保养： 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染。 4.柱的保养： 1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动; 2)当柱子和色谱仪 联结时，阀件或管路一定要清洗干净; 3)要注意流动相的脱气; 4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相; 5)进样样品要提纯; 6)严格控制进样量; 7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品; 8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱; 9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。 5.检测器(UV)的保养： 1)紫外灯的保

相关专题 液相色谱和气相色谱技术 1、流动相的抽作要求： 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤; 流动相脱气至关重要(可采用抽滤，超声波脱气等方法)。 2、吸滤头： 特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。 3、单向阀： 如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗! 4、泵头： 泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等)。 5、过滤器 ： 当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染， 拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。 6、排液阀： 此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。 7、手动进样器： 平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在

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