ELISA 实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏，强特异的优点。因此,应建立实验项目的标准操作程序(SOP)。 加样 ◎加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板的1/3 处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 ◎每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。 ◎样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加 ...

　ELISA试剂的评价（evaluation）分两个方面：一是试剂本身的质量评价，符合一定要求后才能生产供应；一是在临床应用中效果的评价。以肝炎ELISA诊断试剂为例，首先必须通过中国药品生物制品检定，以得到生产的许可。检定内容除包装、标签、说明书等外，对试剂的性能，如特异性、灵敏度、精密度和线性等均需逐项检定，通过对一系列参比品的检测，结果符合要求者才为合格。ELISA试剂的临床质量评价是用该试剂对临床样本进行检测 ...

（一）酶标抗体的条件1．纯度高、含杂蛋白少,用IgG优于血清抗体，用Fab优于IgG。 2．特异性强 即抗IgG与IgG在免疫电泳上只有一条沉淀线,与IgG的全血清也只有一条沉淀线,这才算是特异性的单价抗体。 3．效价高 一般琼脂扩散鉴定为1�64以上才算合格。 （二）酶标记方法 1．交联法交联法通常用的交联剂是戊二醛，戊二醛商品大多为25%的水溶液，利用戊二醛分子上对称的两个醛基，分别与酶和蛋白质分子中游离的氨基、酚基等以共价键结合而进行 ...

免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 1.1　抗原　　抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapt ...

　1．抗sm 　　【正常参考值】阴性 　　【临床意义】 　　是系统性红斑狼疮（SLE）的血清标记抗体，阳性可达30%左右。 　　2．抗rRNP 　　【正常参考值】阴性 　　【临床意义】 　　是SLE的又一血清标记抗体，阳率10%。 　　3．抗u1RNP 　　【正常参考值】阴性 　　【临床意义】 　　在混合性结缔组织病（MCTD）中阳性率高达95%以上。在SLE中，该抗体阳性与雷诺氏现象有关。 　　4．抗SSA 　　【正常参考值】阴性 　　【临床意义】 　　在干燥综合征（SS）中阳性率为60%，也可见于其它多种自身免疫性疾病，包括SLE（35%）、硬皮病 ...

1.抗原决定簇 ( antigenic determinant)/ 表位 ( Epitope)： 是存在于抗原分子表面，决定抗原特异性的特殊化学基团，一般由5～8个氨基酸残基、短寡糖残基、核苷酸残基组成。抗原决定簇是被免疫细胞和抗体分子识别的标志，是免疫反应具有特异性的物质基础。 An antigenic determinant, a site on the antigen that the immune system responds to by making antibody, can frequently be o ...

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。 1　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃ ...

1 抗体的酶标记及质量鉴定本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上，标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化，洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS，流速为15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度计测A280吸光度值，以洗脱体积为横坐标，吸光值为纵坐标做图，收集第一峰即为酶标抗体峰。标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值，计算免疫球蛋白量、摩尔 ...

1. 目的：采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性。 2. 该SOP变动程序 本标准操作规范的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 3. 基本概念 【质量控制】 是监视ELISA操作全过程，排除误差，维持标准化操作的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的： 1. 确定控制的对象； 2. 规定控制对象的标准（预期值）； ...

1. 目的：保证ELISA检测结果准确可靠, 充分发挥其方法学的优点。 2. 该SOP变动程序：本标准操作规范的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 3. 方法 3.1 分析前质控 3.1.1 人员培训 ⑴实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识： 4检验项目的基本原理（ELISA原理）； 5临床意义； 6熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点； 7熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）； 8 ...

免疫细胞如何快速而有效地捕获流感疫苗、促成保护性的抗体反应？在3月在线出版的《自然—免疫学》期刊上，研究人员解释了这种机制。抗原是一种被引进人体内后可以促进抗体产生的物质。抗原呈递枝形细胞是一种能捕获和处理抗原的免疫细胞，并能让这些抗原激活其他免疫细胞如B细胞等。实验中，疫苗使用的抗原是一种沉寂态的流感病毒。MichaelCarroll和ShannonTurley发现，引流淋巴结中的抗原呈递枝形细胞抓住了病毒 ...

移植排斥反应是反映由移植抗原诱导的免疫应答所致的移植物功能丧失或受者的机体损害的一种免疫损伤。主要原因是供受体间组织相容性抗原的差异。排斥反应有两种基本类型：宿主抗移植物反应（HVGR）和移植物抗宿主反应（GVHR），临床上多见是前者；根据发生的机制、时间、速度和临床表现，HVGR又可分为3种类型：超急排斥反应；急性排斥反应；慢性排斥反应。 　　一、超急性排斥反应 　　超急排斥反应发生在移植物与受者血管接通的数分钟到数小时内，出现 ...

超急排斥反应发生在移植物与受者血管接通的数分钟到数小时内，出现坏死性血管炎表现，移植物功能丧失，患者有全身症状。发生的基本原因是受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统，导致血管内凝血。常见于下列情况： 　　①ABO血型不符； 　　②由于多次妊娠或反复输血等使受者体内存在抗HLA抗体； 　　③移植物保存或处理不当等其他原因。超急排斥发生迅速，反应强烈，不可逆转；需立即切除移植物，否则会导致受者死亡。如果事先认真 ...

急性排斥反应是排斥反应最常见的一种类型，多发生在移植后数周到l年内，发生迅速，临床表现多有发热、移植部位胀痛和移植器官功能减退等；病理特点是移植物实质和小血管壁上有以单个核细胞为主的细胞浸润、间质水肿与血管损害，后期在大动脉壁上有急性纤维素样炎症。急性排斥出现得早晚和反应的轻重与供——受者HLA相容程度有直接的关系，相容性高则反应发生晚、症状轻、有些可迟至移植后2年才出现。急性排斥反应经过及时恰当的免疫抑制治疗 ...

慢性排斥反应属于迟发型变态反应，发生于移植后数月甚至数年之后，表现为进行性移植器官的功能减退直至丧失；病理特点是血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成，有时伴有血管硬化性改变。其机制可能为急性排斥细胞坏死的延续；炎性细胞相关的慢性炎症；抗体和细胞介导的内皮损伤；管壁增厚和间质纤维化。本型反应虽然进展缓慢，但用免疫抑制治疗无明显的临床效果。 　　以上属宿主抗移植物反应（HVGR）。移植物抗宿主反应（GVHR）多发生于同种骨髓 ...

化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型： 　　（一）化学发光酶免疫测定 　　化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。 　　（二）化学发光免疫测定 　　化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光 ...

【目的】保证免疫金标技术检验准确性 【本SOP 适用范围】免疫金标技术 【该SOP 变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【原理】氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒，颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥，使其保持一个比较稳定的胶体状态，故称作胶体金。利用胶体金颗粒的高电子密度及其表面能结合生物大分子(如抗体、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A 等)以 及具有一定颜色等特性， ...

免疫浊度法本质上属于液体内沉淀反应，其特点是将现代光学测量仪器、自动化检测系统和免疫沉淀反应相结合，可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。 　　（一）免疫浊度法原理 　　当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时，抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度，如形成的复合物增加，反应液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。 　　按照仪器设计的不同分为透射比浊仪测定法和散射比浊仪测定法。 ...

免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反映的结合产物。这种技术有两大优点，一是加快反应的速度，二脸皮是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应，以此做更细微的分析。 免疫电泳技术的种类有很多，基本类型有： 1、免疫电泳 2、放射免疫电泳 3、对流免疫电泳 4、火箭免疫电泳 5、免疫固定电泳

可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。 1、环状沉淀反应：是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未 ...