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【交流】miRNA研究,可以很简单

无论您的研究内容是遗传发育、干细胞、调控,还是疾病……无论您的研究物种是人、大鼠、小鼠,还是植物……无论您的样本类型是组织、细胞、血液,还是石蜡切片……您都可以很简单、很轻松地研究miRNA!什么是miRNA?MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度为22nt左右的非编码单链RNA分子,在生物进化过程中高度保守。miRNA分子可与靶mRNA3’UTR区或编码区通过碱基互补配对原则特异性结合,诱导靶mRNA降解或 ...

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【资源】[分享] 原版英文电子书《MicroRNA Protocols》

1. The MicroRNA: Overview of the RNA Gene That Modulates Gene Functions2. Structure Analysis of MicroRNA Precursors3. MicroRNA Biogenesis: Isolation and Characterization of the Microprocessor Complex4. Recognition and Cleavage of Primary MicroRNA Transcripts5. Mouse Embr ...

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【共享】一种快速查找目的基因启动子、shRNA等相关信息的方法!

如果有人告诉你有一种不用去NCBI、UCSC、DBTSS等数据库,也不用众多的启动子分析软件去苦苦倒腾,就能准确、快速、高效、直接、简洁、明了的获取目的基因的启动子以及cDNA、shRNA、miRNA等重要信息,道友们一定不会相信,而在今天之前我也不相信,而事实是下面我要分享的这个东东介于牛A和牛C之间,很牛B啊!道友们不信? 去这个网站吧http://www.genecopoeia.com/product/search/i ...

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【交流】反向PCR法构建缺失突变

不知道大家做突变的时候都用什么方法。有经验的战友不妨来交流一下啊。说说我的先。由于本人没有这方面的经验,所以**求各位战友的意见和建议啊。大家多多批评指正。我要做一构建好的质粒上约100bp的片段的缺失,利用反向PCR的方法。以下是利用实验室现有资源的实验设计:1 Phosphorylation of the 5’-end of a primer10×kinase buffer 2ulprimer (20uM) 5ul10mM ATP 2ulpolynucleo ...

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2003年Nucleic Acids Research最热门文章集锦

Nucleic Acids Research是做生物信息学和分子生物学必读的文章,许多文章本身就是经典的protocol,这里收集2003年最热门的文章,希望大家能喜欢,这里包括最热门的文章,最热门的数据库,最热门的方法学文章,以及Nucleic Acids Research上自从创立以来阅读最多的文章。TOP STANDARD CATEGORY PAPERS, 2003Short hairpin type of dsRNAs that are controlled ...

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【资源】Methods In Molecular Biology Volumes 1-100

终于开始批量流传到公开网络上了估计存活时间不会太长Methods In Molecular Biology Collection - Volumes 1-100MMB.Vol1.Proteins.rarMMB.Vol2.Nucleic_Acids.rarMMB.Vol3.New_Protein_Techniques.rarMMB.Vol4.New_Nucleic_Acid_Techniques.rarMMB.Vol5.Animal_Cell_Cu ...

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【旧贴整理】质粒相关问题

1。大量提取质粒试剂盒推荐http://www.dxy.cn/bbs/thread/1270315http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/448717_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2267272_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=370826&sty=3&keyword ...

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【共享】新一代的RNAi技术:非对称小RNA干扰

RNAi从发现到现在,短短几年时间,已经由一种生理现象发展为生物医学研究的重要手段和具有很大潜力的治疗手段。目前,哺乳动物细胞的RNAi主要依赖于长19~21bp,3‘端悬挂2nt的对称的RNA双链,即短干扰RNA(siRNA)。这里,作者报道了一种长15bp、3’和5‘端分别悬挂3nt的反义核苷酸的非对称的RNA双链,即非对称干扰RNA(aiRNA),可以有效诱导哺乳动物细胞RNAi的发生。研究表明aiRNA诱导的 ...

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【交流】shRNA:选19还是29bp?

以下是美国冷泉港(CSHL)Hannon领导的研究小组报道的29bp shRNA可以在哺乳动物中起RNAi效应:Paddison PJ, et al. Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells. Genes Dev. 2002 Apr 15;16(8):948-58. 免费全文网址:http://www.genesdev.org/cgi/content/full/16/8/948该 ...

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【共享】 质粒提取的原理(感觉很好的)

为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液:溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此,如 ...

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关于疫苗中Vero传代细胞DNA残留检测技术

多年来,国外已成功的研制了采用Vero细胞生产疫苗并获准上市,包括人用狂犬病纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活(纯化)疫苗(IPV),并在中国注册或正在注册申请中。在上世纪九十年代后,国产的采用Vero细胞生产的人用狂犬病纯化疫苗、乙型脑炎纯化疫苗、肾综合征出血热纯化疫苗被批准上市。近年来,又有一些企业申请乙型脑炎纯化疫苗、脊髓灰质炎灭活(纯化)疫苗、甲型肝炎灭活疫苗进行临床研究或上市。随着采用Vero细胞生产疫苗种类的增多, ...

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【共享】“常见重大疾病全基因组关联分析和药物基因组学研究”重点项目课题申报指南

“常见重大疾病全基因组关联分析和药物基因组学研究”重点项目课题申报指南科技部 日期: 2009-03-10关于发布“十一五”国家高技术研究发展计划(863计划)生物和医药技术领域“常见重大疾病全基因组关联分析和药物基因组学研究”重点项目课题申报指南的通知各有关单位:全基因组关联分析和药物基因组学已经成为国际上新的研究热点,对于预防、治疗常见重大疾病具有重要战略意义。根据863 计划“十一五”发展纲要,国家决定实施“常见重大疾病 ...

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【共享】关于连接的一点心得.

前一段时间一直在做酶切连接,特别难连,做了两个月,终于被我揪出来了,现就我所遇到的问题和我自己的摸索,经验,教训,一一列出来,希望对大家有所帮肋.我做的是酵母双杂交,需构建的是目的片段B接入载体PM中,以及目的片段A接入载体PVP中.其中B 1130bp,A 3760bp.1.多扩几管,得大量的高保真PCR产物.(多扩几管,因为后面的实验中你会发现每切一次产物越来越少)2.PCR后进行切胶纯化(这步必须切胶纯化,因为决不可在产 ...

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siRNA与RNAi综述

1 前言RNA是生物体内最重要的物质基础之一,它与DNA和蛋白质一起构成生命的框架。但长久以来,RNA分子一直被认为是小角色。它从DNA那儿获得自己的顺序,然后将遗传信息转化成蛋白质。然而,一系列发现表明——这些小分子RNA事实上操纵着许多细胞功能。它可通过互补序列的结合反作用于DNA,从而关闭或调节基因的表达。甚至某些小分子RNA可以通过指导基因的开关来调控细胞的发育时钟。2 综述2.1 研究历史与发展前景2.1.1 定义双链 ...

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【共享】外源DNA和质粒载体的连接反应

外源DNA和质粒载体的连接反应外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口,当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的5'磷酸和3'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化,这两种酶 ...

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分子生物学技术在线讲座

http://61.167.57.67/dwhx/dwhx_26/教育网内都可在线看第八节 分子生物学技术 (1:21)一、 DNA重组技术 (0:48)DNA重组技术定义 (1:37)DNA重组技术别称 (0:11)(一)DNA重组技术的基础 (1:37)1.核酸的制备 (0:52)2.限制性内切酶 (0:36)限制/修饰系统 (0:32)限制性内切酶 (0:16)I型限制性内切酶 (0:31)Ⅱ型限制性内切酶 (1:08)EcoRI的识别序列 (0:47)限制性内切酶切割DNA的方式 (0:2 ...

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【共享】[文献] 功能基因组学中的功能缺失研究策略

感谢参与!给出链接即可!如果可能,楼主可以给一个comment。0 引言在功能基因组学(functional genomics)研究中,阐明各种蛋白的结构和生物学功能是其核心任务,不仅是生物学的主要研究方向,而且也是医学研究的主要内容,毕竟细胞的功能和表型是由细胞中的蛋白来主导的,许多疾病都是蛋白结构与功能、表达水平与调节的异常引起的. 研究蛋白的功能,常常通过改变蛋白的表达水平,观察细胞的生物学特性的变化,来研究蛋白相应的 ...

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【原创】暗室实验(化学发光底物检测方法)及Western Blot实验优化方法

暗室实验暗室实验的操作流程:1. 新鲜配制1-2ml工作液(A液与B液1:1或1:40混合配制)2. 进入暗室,在黑暗的条件下,加入1μl未稀释的二抗(HRP连接物)3. 混合后,可立即在暗室中观察到蓝色光暗室实验的注意事项:? 工作液按正确比例混合,且新鲜配制? 在暗室中加入二抗? 直接使用未稀释的二抗? 加入二抗后,立即观察注:暗室实验可同时检测底物是否有活性,以及二抗是否有活性。如果暗室实验结果阴性:更换其它二抗,再次进行检测;再次检测结果仍为 ...

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真核细胞的DNA的制备与定量

真核细胞DNA的制备与定量制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。这一方 ...

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【交流】浅谈Gene序列搜索

在分子生物学领域里摸爬滚打了两年多,在园子里也逛了一年多,没写过什么原创贴子,这算是第一个,只是浅显的经验,希望与大家交流、分享、共勉!!!我看到了很多帖子,大家在查找Gene序列的时候,有些战友总是弄不明白那个是自己想要的序列,因为在NCBI的GeneBank里面搜索以后,实在是有太多的序列出现,而且长短不一,名称各异,DNA,mRNA ……,有点让人眼花缭乱,下面就是我的一点小经验:通常大家都是在Nucleotide里 ...

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