论坛里发的都是关于细胞的免疫共沉淀的实验方法,这是我做组织时用到的方法,希望能给大家有点帮助实验方法如下:第一步：制备组织裂解物1. 把组织剪切成细小的碎片。2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当 ...

蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜（湿式转膜）1）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后，小心取出带有凝胶的玻板，用割胶刀沿下边缘小心撬开短板，按样品的多少切下合适大小的凝胶。浸泡在转膜缓冲液中5分钟左右，以平衡离子强度。视情况决定是否切角标记。 2）电用结束前，应泡好3M滤纸2-6张均可（普通滤纸也可）和1张硝酸纤维素滤膜。 3）戴上手套按如下顺序安装转移装置： a.平放底部电极（阴极），放一张海绵垫片。 b.在海绵垫片上放置1- ...

1. 参考书推荐A. 对初学者看什么资料比较好？解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。2. 针对样品的常见问题B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是 ...

最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct valuefor the same qPCR Assay (ΔCt) to account forchromatin sample preparationdifferences.ΔCt = (Ct - (Ct -Log2 (Input Dilution Factor)))Where, Inp ...

蛋白质技术中常常要用到lysis buffer，各个实验室的lysis buffer的配方是不同的，开设个专题，希望大家详细谈谈自己使用的lysis buffer的配方，以及各个组成成分的作用，方便广大蛋白质战友。先介绍一下我们用的：PBS缓冲液，不用多说；TRITON X-100Triton X-100中文名为曲拉通X-100，分子式为t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH, x=9-10，平均分子量为647。 常用的非离子性去垢剂，主要 ...

1.GST-Pull-Down原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3828600_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1168462_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1197579_0.html2.GST-Pull-Down试剂盒购买http://www.dxy. ...

在园子里看到有好多战友询问有关蛋白保存的问题，自己对于这个问题也一直模模糊糊，今天特意搜集了一下园子里有关蛋白质保存的一些有价值的帖子，希望能给各位战友提供一些方便http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1790263_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4680926_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs ...

General Western Blot ProtocolMany variations exist among protocols for running Western blots. These variations address all aspects of the procedure from the choice of gel buffers and membranes to transfer conditions, blocking and processing steps. The following procedure was wri ...

蛋白纯化http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4774978_1.html 幻灯片http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1922610_1.html 原理图蛋白纯化网站（蛋白纯化方案均有详细PDF）http://www.dxy.cn/bbs/thread/7134009纯化后制备多抗及抗体蛋白保存http://www.dxy.cn/bbs/actio ...

(^)(^)(^)(^)(^)(^)亲爱的战友，欢迎你来到丁香园 (^)(^)(^)(^)(^)(^)＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝快速了解丁香园，快速了解蛋白版－－－－从这里开始......＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝(~B丁香园的组成(~B___◇ 丁香园信息发布区 ◇(~B__◇临床医学讨论一区◇ (~B__◇临床医学讨论二区◇ (~B__◇临床医学讨论三区◇ (~B__◇临床医学讨论四区◇ (~B__◇临床医学讨论五区◇ (~B__◇ 基础医学讨论区◇ (~B__◇ 药学讨论区 ◇ (~B__◇ 生命科学讨论区 ◇ (~B___◇ 实验技术讨论区 ◇ (~B__◇ 预防医学与卫 ...

做实验熬夜，暂时只能整理这么些了。：）浅谈分子伴侣与蛋白质折叠http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=451813&sty=1&tpg=3&age=0蛋白一级结构预测三级结构的软件或网站http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=701140&sty=1&tpg=5&age=0《Protein Structure,Stability, and Folding》http:/ ...

版子上最近有好几位朋友提供了不错的双向电泳的凝胶分析软件手册等内容(感谢merlynhuang兄以及czlong2008兄)，我把他们归纳一下，欢迎各位补充使用感受:)I. 软件与使用手册下载1. BIORAD公司出品PDQuest V7.3.1 下载PDQuest V7.3.1英文使用手册PDQuest中文讲义（感谢merlynhuang兄提供）2. Amersham公司出品ImageMaster V5.0版下载ImageMaster V5. ...

第二十一章 原核表达及其表达载体——【蛋白质技术版】第二十三章 蛋白电泳——【蛋白质技术版】已有BeetleHead报名编写初稿，请及时更新！第二十四章 Western——【蛋白质技术版】已有drake015报名编写初稿，请及时更新！第二十五章 表达蛋白的分离与纯化——【蛋白质技术版】已有princessann 报名编写初稿，请及时奉上！第二十六章 表达蛋白的生物学活性的检测——【蛋白质技术版】注：对蛋白质方面感兴趣的战友请到此跟贴！请申请的战友及 ...

包涵体的出现可能是很多朋友最头疼和无奈的事情了，我在这里将过去的一些知识和经验总结如下，希望我和大家都能从中受益！如何溶解包涵体http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=720959&sty=3&keywords=%B0%FC%BA%AD%CC%E5http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1877293&sty=3&keywords=%B0%FC%BA%AD ...

蛋白质的检测与分析——Western blot一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质（或酶）。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western（西）印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上并与第一 ...

选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于 ...

我上个月做了 mating （酵母双杂交的一种办法）。现在已经做到了，X-gal assay。从230多个克隆里 第一次选出了68个蓝色克隆。第二次 挑选出了74个蓝色克隆。可是，对比发现重复变蓝的只有 11个。What can I do for it NEXT~我的具体步骤是。一 ：文库建立1. mammalian cell total RNA -- Poly A RNA -- dsRNA -- 提纯 dsRNA。2. 将提纯的dsRNA 转染到AH109细胞株,涂在 150ㅠ待 3~5天克隆出现 并长势饱满.3. 每个150ㅠ， 放入5ml fre ...

http://www.ab-mart.com.cn/content400102.aspx一、样品制备对于Western Blotting实验而言，样品处理是关键步骤之一，获得的蛋白样品必须均质、可溶，并解离成单个多肽亚基，且尽量减少相互间的聚集，使其最终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时，需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器（如核抽提物），或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等 ...

这是我整理得生物化学资料，今年考北大生物化学考绩不错。希望斑竹加精。张迺衡编著的（北京医科大学，第二版)§§§蛋白质的化学1.用紫外吸收法测定溶液中蛋白质含量时，波长是多少？用此波长的依据是什么？色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸在280nm附近有最大吸收，多数蛋白含有这tyr， trp残基。所以在紫外分光中用280nm对它们进行检测。2.氨基酸有哪些成色反应？哪些是肽，蛋白质共有的？各有什么用途？氨基酸的成色反应有茚三酮反应，丹磺 ...

电泳是蛋白质技术的一个重要方面，也是问题教多的方面，我整理了我们的相关内容，便于解决相关问题！内容较多：(求教）做蛋白质表达差别分析（双向凝胶电泳/MS）的费用（求助）2D胶能用普通的单向垂直电泳装置跑吗？（求助）蛋白电泳**求蛋白质毛细管电泳试剂配方以及各项参数蛋白电泳各带为什么总连成一条线？聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的一些问题中文双向电泳手册【讨论】2D电泳Tricine－SDS-PAGE体系电泳中的问题？2D电泳求助 ...