提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香实验推荐阅读
【进展★热点】Cell:组织内蛋白的糖基化位点检测新方法

【推荐指数】★★★ ★【文章来源】D. Zielinska, F. Gnad, J. Wisniewski, M. Mann. Precision Mapping of an In Vivo N-Glycoproteome Reveals Rigid Topological and Sequence Constraints.Cell, May 28, 2010.http://www.cell.com/abstract/S0092-8674%2810%2900386-7【内容简介】N-连接的糖基化是一种具有重要生物学意义的翻 ...

丁香实验推荐阅读
【转帖】Western Blot 内参选择

版内常看到WB内参问题,看到一篇文章,觉得不错,转帖在此。http://blog.bioon.com/user3/23049/archives/2007/137682.shtmlWestern Blot 内参选择 作者:明日百傲要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺 ...

丁香实验推荐阅读
【建议】关于如何提蛋白质纯化问题(附例)

在得不到足够信息的情况下,往往比较难以分析,大家多是在假定一些信息来回答问题,这样有时候碰巧符合了,但也有推断错误的时候。这样对解决问题是不利的。如果不涉及到技术保密问题,关于蛋白质纯化问题都建议按下列信息来提问。1、建议贴张SDS-PAGE图来分析一下,最好包括:Marker,胶浓度,变性还是非变性诱导前诱导后破菌上清破菌沉淀沉淀洗涤上清变性溶解上清变性溶解沉淀柱纯化前柱纯化穿透柱洗脱等各个样品。标上mark ...

丁香实验推荐阅读
【资源】WESTERN BLOTTING心得

做了五个月的WB,有一点点小心得,给新手点经验.蛋白提取:1.总蛋白提取(胞膜,胞浆,胞核):组织匀浆后,15000g, 4度, 20分钟后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脱氧胆酸钠0.5克, SDS 0.1克, 加undefinedPBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加)7.4mg/ml PMSP异丙醇溶液: 取A mg PMSF 加 A/7.4 ml 异丙醇.工厂-20度储存2.组织膜蛋白提取:所在操作冰上进行(1)取组织,用PBS冲洗干净组织上的血液. 加入 10ml B ...

丁香实验推荐阅读
【专题讨论】膜蛋白的分离

膜蛋白的种类繁多,约占总蛋白的30%,同时赋予细胞膜非常重要的生物学功能,但是由于其特殊的性质和结构特点,我们获得膜蛋白相比较其他蛋白来说要困难得多,因此如何获得大量有生物学活性的质膜蛋白对我们显得非常的重要,本人曾经试图获得一肿瘤组织中的p-gp,也许是由于实验室条件的限制,费了九牛二虎之力也未能获得一个比较理想的结果,如果大家有什么好的分离膜蛋白的经验不妨贴出来,供大家一起分享,共同学习,共同进步。以下是我 ...

丁香实验推荐阅读
【资源】常用试剂公司网址

最近需要购买试剂,人家介绍什么santa-cruz,BD,DAKO,newmark 公司,结果回来上网查找时 直接输入这些公司名字还是不能直接到达公司网站,四处搜搜,发现有些朋友提供了一些常用公司的网站,现贴出来一起分享,其他朋友继续补充。。。试剂公司网站毕龙—毕特博商务网http://www.bilong.com中国科学器材网http://www.sciequip.com.cn/鼎国生物http://www.dingguo.com/生 ...

丁香实验推荐阅读
综述:蛋白质分离纯化进展

我收集了些资料,希望大家喜欢与传统方式相似,重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异,即以分子的大小,形状,溶解度,等电点,亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。与此相对应的分离纯化方法参见表1。从表1可看出,当前蛋白质的纯化主要是依靠层析和电泳技术。由于重组蛋白在组织和细胞中仍以复杂混合物的形式存在,因此到目前为止还没有一个单独或一整套现成的方法把任何一种蛋白质从复杂的混合物中分离出来,而 ...

丁香实验推荐阅读
【转帖】对于多糖研究的一些看法(转至新语丝)

◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.xlogit.com)◇◇  对于多糖研究的一些看法  天山童姥  (本文纯属学术争鸣,不针对某个人或者某个研究单位)  近几年来,多糖的研究很热门,尤其是各大院校的食品专业科研人员纷纷涉足于此领域,翻看一些国内食品科学杂志,基本上每期都有多糖的研究,有时甚至一期有好几篇。来源更是五花八门,真菌多糖,枸杞多糖,茶多糖,等等。对于多糖的研究,我有一些 ...

丁香实验推荐阅读
[资源]【整理】蛋白版05年12月无人应助贴

整理了一下2005年12月份蛋白版的无人应助贴,以支持版主的工作已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列应助战友请到积分申诉区给出链接,谢谢哪位用过quantityone软件用quantityone软件进行WB的条带处理。哪位用过的朋友稍微讲讲啊http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4994642&sty=1&tpg=22&age=0 跨膜蛋白分析及做图软 ...

丁香实验推荐阅读
【Jounal club】生命科学领域中的成像术

说是成像术,其实就是拍照,从最常规的简单的EB染色,CBB染色,到荧光成像,化学发光,再到最危险的同位素成像等,原理都是差不多,即条带和背景之间信号的差异,只是过程和要求不同而已从灵敏程度来划分常规染色 ug-ng级荧光 ng-pg级化学发光 pg级同位素 pg-fg级做科研过程中,如果没有其他因素的限制,每人都希望检测灵敏度越高越好,这样真实程度也就越高,越不容易出现漏检的情况,能决定科研项目是否有必要进行下去的可能等等,所以我 ...

丁香实验推荐阅读
【原创】Western blotting细节——献给完全一个人做此实验的xdjm们

在正文开始之前,请允许小妹我简单介绍一下个人情况,顺带为即将独自一人做此实验的xdjm们打打气。小妹我上无师兄师姐(上届师姐于我开始做实验时已毕业),下无师弟师妹(下届师弟师妹尚未开学),由于种种原因被老板发配到外院一个生物治疗中心进行我的实验。在我开始做Western时,制胶器及转膜仪等均未开封,老师们均表示以前也未做过Western。所以我是第一个吃螃蟹的人,吃苦或许是注定的。我自己找了一个常做Wester ...

丁香实验推荐阅读
western blot详解,多年积累加上经验总结,觉得好就顶一下

工作原理蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶 ...

丁香实验推荐阅读
【原创】Western Blot经验总结

以前自己总结的Western Blot经验。原先看到版上WB资料泛滥,不想发了。但是后来想想存在电脑里也是浪费,还不如共享一下:)希望对大家有用!1、缓冲液的选择,是用PBS/PBST,还是用TBS/TBST?(1)PBS/PBST不适合AP系列,TBS/TBST适合AP和HRP体系。(2)另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适。2、如果用HRP体系,那么不能用叠氮钠做防腐剂。因为叠氮钠会抑制HRP的作用。3、WB中抗体的选择:单 ...

丁香实验推荐阅读
【专题讨论】western blotting 培养细胞的蛋白粗提时,用注射器抽吸和超声波破碎有区别吗

我做了半年western blotting了,p53,p15都能做出来,就是做不出来p21和p27.万般无奈,买了CST的9932#cell cycle sample kit,可还是做不出来。上周给CST发了质量投诉报告,老外处理的很积极,5天之内就给我发来了反馈意见。我的操作基本上是按照CST的说明书进行。只有一点不同,我制备蛋白样品的时候用1毫升注射器在冰浴中反复快速抽吸RIPA-细胞悬液,直到液体清亮为止。我没有按说明书上 ...

丁香实验推荐阅读
【资源】双向电泳之第一向等电聚焦(IEF)==非常详细

双向电泳的第一向IEF 电泳采用IPGphor,实验将变得很简单。IPGphor 包括半导体温控系统(18°C-25°C)和程序化电源(8000V,1.5mA)。可采用普通型胶条槽一步 完成胶条的水化、上样和电泳,大大减少操作步骤。IPGphor 一次可进行12 个胶条槽的电泳(7, 11, 13 ,18 ,24cm),因采用高电压(8000V),可缩短聚焦时间。最新推出 的通用型杯上样胶条槽因采用可移动的上样杯和电极,适合任何长度的IPG 胶条,尤其适合极性等电点 ...

丁香实验推荐阅读
【专贴】蛋白版无人应助帖见1楼新版本链接

~~广~而~ 告~ 之~~本帖后续已转至新版本-- 【专帖】蛋白版无人应助帖¥¥加分从优,每周更新,请勿跟帖 请战友于新版本阅读应助规则和更新信息 2006-10-20周一至2006-11-26周日 2006-11-29整理总无应1 【求助】为什么用碘染淀粉酶会显紫红色?http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=7566374&sty=1&tpg=8&age=02 【求助】如何进行蛋白质定量动态的观察?http://www.dxy. ...

丁香实验推荐阅读
蛋白质提取与纯化技术

蛋白质提取与纯化技术  选择材料及预处理  以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的 ...

丁香实验推荐阅读
【原创】SELDI-TOF 主题“公园”

关于这个主题想了很久,联想到篮球公园,因拟此题。想了很多方面,总觉得还是大点好,这样可以容纳更多观众与选手,呐喊、助威,才能畅所欲言,充分享受自由的空间,否则就像我们的宿舍一样狭小,大家都不愿意呆,就是回去了,也就是睡觉(不说话,哈哈)SELDI的出现,也就一、两年的事情,现在还没有人去关心他的原创,就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前,没有人关心田中耕一一样。在基因组学取得巨大成功之 ...

丁香实验推荐阅读
[转贴]包涵体纯化复性

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂一、菌体的裂解1、怎样裂解细菌?细胞的破碎方法1.高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2.玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再 ...

丁香实验推荐阅读
我翻译的wetern blotting 操作方法!很详细!

WESTERN BLOT 操作1一 裂解细胞提取蛋白.1试剂/溶液裂解液10ml 10% SDS10ml 甘油10ml β-巯基乙醇8ml 0.5M Tris Ph6.81ml 0.1% 溴酚蓝51ml 单蒸水2方法1)将培养的细胞消化离心,数量需达到106,(可用PBS洗一次.)2)重悬细胞于100μl加热得裂解液,搅拌并煮沸5-10分钟,破坏DNA.3)冷却(但不能在冰上,否则SDS会沉淀),离心收集液相.4)振荡混合.5)得到样品.6)样品储存于-20度备用.二 SDS-聚丙酰 ...

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序