近几天回答了蛋白版几个有关压片和显影的帖子，发现在这一块还没有比较系统的论述。特贡献了western显影常见问题及解决方案，是我的经验总结，以供大家参考。其中绝大部分问题是我所遇到过的，其他个别我没遇到过的是参照pierce公司的说明书。限于字数，语言比较简洁，如对其中内容有疑问或建议可跟帖。Western荧光检测取决于抗原含量—一抗敏感度—二抗敏感度—底物敏感度—显影和定影效率这一系统。我的经历认为确保万无一 ...
开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的 ...
1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS ...
完成《WB实战指南》后，朋友曾央分享点免疫共沉淀方面的咚咚；当时不得不回绝。因为，WB指南是基于这些年的回复的汇总，基本上方方面面的问题都有提及，只需要做些串联；而论及coIP，目前在国内还不太普及，尽管它已经是生化领域最基本的技术之一。因此，再想写这么个长篇颇耗时间，于我的时间和精力太为难；不过，今天是个特殊的日子，凑凑热闹吧。——人，如果在某些方面成功了，必然在另外一面有亏欠，也许这就是上帝的公允吧。——在自己最擅长的 ...
最近我们实验室想做这个试验，以前也没有做过，如果有战友做过这个试验，希望介绍点经验和教训，谢谢乐。应战友要求，在网上找乐一下基础资料，方便大家查看，虽然下面也列出了试验方法，但在实际实验室可能并不一样，希望战友们较少些自己的亲身体会，让大家和我本人在即将进行的试验中少走弯路。先谢谢各位了免疫共沉淀 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用 ...
由于上次求助无人回应，一气之下遍找资料，汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方，希望能对其它求助兄弟有所帮助。菌体/细胞裂解法汇总一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。http://cache.baidu.com/c?word=%B4%F3%B3%A6%3B%B8%CB%BE%FA%2C%C1%D1%BD%E2&url=http%3A//www% ...
常用的实验用溶液、试剂常用缓冲液的配制方法常用试剂的配置方法常用试剂配制手册分子生物学实验常用试剂配制常用试剂的配置方法【分享】分子生物学常用试剂的配制方法还有一些实验当中需要的比较重要的资料参考实验室常用技术参数资料实验仪器名称中英文对照表实验室常用技术参数资料1实验室常用技术参数资料2实验室常用技术参数资料3http://www.biox.cn/UpLoadFiles/Biox/Files/solutio ...
推荐一个网站，可以下载如下分子生物学图书，都是精品：• 斯坦福大学分子生物学讲义http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/3219.html• 普通生物学——生命科学通论http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/4590.html• 分子克隆实验指南http://www.foodmate.net/ziliao/sort/14/7540.html• 分子生物学技术和食源性致病菌的快 ...
先说一下Tricine胶的好处。Tricine胶比较容易将样品压平，具体原因我也没有搞清楚，但可以肯定的是这种胶跑出来的Marker又细又直，同样，显出来的条带也压的很好。与普通的SDS-PAGE胶跑出来的结果相比，Marker扩散没有那么厉害，各泳道条带间隔明显，不像普通胶的条带容易连到一起。反正跑出来的条带就是很漂亮。Tricine-SDS-PAGE胶的配方：（我一直用的就是10%这个浓度，把8KD和280KD ...
1,关于使用三氯醋酸沉淀法后蛋白质难于重悬的问题Q:1,Hi !I have been trying to clean and concentrate proteins form eucariotic cell culture medium in order to analyse them in 2D. I’ve read some papers were TCA precipitation was used and recommended for this purpose but I have not been able to redissolve my samples. I have u ...
这个protocol应该可以满足大部分人的需求。我孤陋寡闻，因需要检测可以溶于两种不同去污剂的蛋白，看到一篇文献里蛋白提取方法，完全被折服了。太强悍了，蛋白还可以这样提。我以前一直以为裂解液裂解后，沉淀里面没有蛋白了，现在才发现沉淀里还含有大量不溶于裂解液里去污剂的蛋白。故将这个protocol发出来供我和一样的新手学习。我以前是裂解细胞，离心，测浓度，然后直接往整管里加loading buffer，再离心取上清，看 ...
Proteomics: Methods and Protocols 2009-6蛋白质组学方法和技术by J?rg Reinders and Albert SickmannProduct DescriptionSince the development of the concept of “proteomics”, great progress has granted deeper insight into the cellular network, but the enormous range of protein abundance, ...
请到下面这个贴子处认真学习发贴规范，并改正后归还积分！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=4562313&tpg=1&ppg=1&sty=3QUOTE:基于生物化学的经典宝书《Lehninger Principles of Biochemistry》第二版的电子网站,语言：英文。每章内容包括正文、概要、进一步的阅读参考文献、习题及解答，还包括名词解释镜象站点打包下载QUOTE:Lehnin ...
Protein Targeting Protocols（Second Edition）Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 558Publication Date: 2007-03-30 ISBN / ASIN: 1588297020EAN: 9781588297020Binding: HardcoverManufacturer: Humana PressStudio: Humana Press----------------------------------------------------- ...
以下是蛋白论坛关于层析纯化蛋白的大部分有一定深度的帖子（其中大多数讨论对于接触蛋白纯化的新手及做纯化工作的同仁来说都有积极意义），包括亲和层析、疏水层析、离子交换等几个系列，罗列主题多有概括以方便大家寻找。此项工作将一直进行下去直至版块有新的安排为止。层析纯化蛋白讨论集成之一(亲和层析)关于亲和层析的纯度问题CNBr-Sepharose 4B 的再生离子交换层析与亲和层析 离子交换?亲和层析?亲和层析间隔手臂分子的选择关 ...
1. 一般Native-PAGE方法非变性电泳非变性胶蛋白电泳求助：Native-PAGE方法Native-PAGE Protocol2. Native PAGE 分离碱性蛋白求助：碱性小肽非变性电泳非变性电泳的高手请进! 3. 回收目的蛋白如何从凝胶中提取蛋白，谢谢求助：关于从电泳凝胶中如何萃取蛋白质？水平SDS电泳求助有没有方便省钱的方法从PAGE胶回收蛋白想从sds胶里面回收蛋白，几个相关的问题SDS-PAGE电泳后可以回收再复性吗 ...
1.毕赤酵母表达实验手册总结 2.关于毕赤酵母喜好密码子3.几篇关于毕赤酵母的文章 4.毕赤酵母发酵问题5.Help！毕赤酵母破壁问题？6.毕赤酵母转化问题7.毕赤酵母表达实验手册总结 8.关于毕赤酵母菌表达的大作修改稿 9.毕赤酵母分泌表达出现问题～～求救～～10.急！急！关于毕赤酵母表达小肽的技术11.影响外源基因在巴氏毕赤酵母中表达的因素 12.毕赤酵母电转化 13.再谈毕赤酵母的表达问题14.有用pPICZaA做毕赤酵母表达的吗？15. ...
我有个提议：我们做双向电泳的的人不妨在此留下联系方式，以便以后大家交流经验，共同进步。斑竹语:现在整理一下大家的联系方式是：happyf jordanjie@163.com.dyz2002 szwjie@sohu.compengkp pengkp@yahoo.com.cnyglky yglky@sohu.commutongfeige guog@mail.tmmu.com.cnflyingheart liuzy87@sohu.com菊开那夜 dre ...
在发贴之前先，请各位新老站友一定先检索一下相关话题的帖子，以避免对您时间和资源的浪费。目前在蛋白板块中有许多非常好的专业讨论帖子。许多求助的朋友在第一时间选择的可能是发新贴，忽视了以及的功能。您可以在通过键入keyword或者在Poster中输入站友的ID对本版以往的帖子进行检索。一定能在第一时间获取您所需要的信息。在icesugar75、codegreen主任积极倡议下，《蛋白质技术讨论版》中已有众多战友从 ...
163公用信箱，1个多G的生物资源！又上传了大量生物资源到我的公用163信箱，同时做了简单的整理，同广大虫友共享，大家可以随意下载，只是希望大家不要随意对资源进行改动，更不要对信箱密码进行修改，我已对信箱采取了密码保护，希望大家与人方便，自己方便，也希望大家在下载资源的同时，能多顶顶此贴，别让我辛苦上传的资源沉了！大家有什么要求尽可以在此提出来，我会尽量满足大家的要求！！emuchgtj-1@163.com 密码：emu ...
