【专题讨论】Tricine-SDS-PAGE胶的使用方法与心得(可分离8KD--280KD)
丁香园论坛
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先说一下Tricine胶的好处。
Tricine胶比较容易将样品压平,具体原因我也没有搞清楚,但可以肯定的是这种胶跑出来的Marker又细又直,同样,显出来的条带也压的很好。与普通的SDS-PAGE胶跑出来的结果相比,Marker扩散没有那么厉害,各泳道条带间隔明显,不像普通胶的条带容易连到一起。反正跑出来的条带就是很漂亮。
Tricine-SDS-PAGE胶的配方:(我一直用的就是10%这个浓度,把8KD和280KD都做出来了)
分离胶 积层胶
ddH2O 1.85 mL 2 mL
AB-3 1 mL 250 uL
Gel-Buffer(undefined) 1.65 mL 750 uL
甘油 0.5 mL —
10%AP 25 uL 22.5 uL
TEMED 2.5 uL 2.25 uL
(这个配方来自DXY,今天又回来了,呵呵)
undefinedGel-Buffer 配方:(200mL量)
Tris-Base 48.44g
Tris-HCl 31.52g
SDS 0.6 g
pH 8.45,很难溶,可以60°C水浴促进溶解。
AB-3 (100mL量)
丙烯 48g
双叉丙烯酰胺 1.5g
注意:丙烯溶解后会使溶液体积增大,故只要用约80mL水溶解即可,完全溶解后再定容。通风橱内操作,注意保护自己!
外槽电泳液(+极)(Anode Buffer)1undefined
Tris-Base 46.92g
Tris-HCl 17.73g
500mL体积,pH 8.9。
内槽电泳液(-极)(Cathode Buffer)1undefined
Tris-Base 24.22g
Tricine 35.84g
SDS 2g
200mL体积,pH 约8.25。
(内外槽电泳液的体积这样配,是因为一般电泳槽内槽一次只要150mL液体,而外槽需要400-500mL液体。)
Tricine胶比较容易将样品压平,具体原因我也没有搞清楚,但可以肯定的是这种胶跑出来的Marker又细又直,同样,显出来的条带也压的很好。与普通的SDS-PAGE胶跑出来的结果相比,Marker扩散没有那么厉害,各泳道条带间隔明显,不像普通胶的条带容易连到一起。反正跑出来的条带就是很漂亮。
Tricine-SDS-PAGE胶的配方:(我一直用的就是10%这个浓度,把8KD和280KD都做出来了)
分离胶 积层胶
ddH2O 1.85 mL 2 mL
AB-3 1 mL 250 uL
Gel-Buffer(undefined) 1.65 mL 750 uL
甘油 0.5 mL —
10%AP 25 uL 22.5 uL
TEMED 2.5 uL 2.25 uL
(这个配方来自DXY,今天又回来了,呵呵)
undefinedGel-Buffer 配方:(200mL量)
Tris-Base 48.44g
Tris-HCl 31.52g
SDS 0.6 g
pH 8.45,很难溶,可以60°C水浴促进溶解。
AB-3 (100mL量)
丙烯 48g
双叉丙烯酰胺 1.5g
注意:丙烯溶解后会使溶液体积增大,故只要用约80mL水溶解即可,完全溶解后再定容。通风橱内操作,注意保护自己!
外槽电泳液(+极)(Anode Buffer)1undefined
Tris-Base 46.92g
Tris-HCl 17.73g
500mL体积,pH 8.9。
内槽电泳液(-极)(Cathode Buffer)1undefined
Tris-Base 24.22g
Tricine 35.84g
SDS 2g
200mL体积,pH 约8.25。
(内外槽电泳液的体积这样配,是因为一般电泳槽内槽一次只要150mL液体,而外槽需要400-500mL液体。)
版主skykiller留言:
制胶配方中的Tris base是tricine,不是Tris,请战友们注意。
制胶配方中的Tris base是tricine,不是Tris,请战友们注意。