简繁 请教做糖尿病细胞实验3T3-L1、L6、HepG-2细胞的战友，你们用的是哪种胰岛素？我原来用sigma牛胰岛素I5500这个货号的，后来断货了，请教战友换用哪种胰岛素好，如果有相对成熟的条件请赐教，非常感谢！另外国内大细胞库一直找不到合适的胰岛细胞株，请教各位战友用的是哪种，谢谢！lzyn 同学我就是买的sigma的这个胰岛素，我想知道以前你是怎么配的？能告诉我吗？》我的QQ530549736 希望您多给指点。我是研一 ...
已寒 各位前辈，我现在做western，NF-kB的总是出现2条带，有人说有一条是非特异性着色，但我发现两条带之间关系很密切，请看图，不同处理组的两条带中，一条升高则另一条会降低，存在这种关联性，请高手指点。sunnyun 楼主两条带是在目的条带位置处吗？我最近也做p65出来两条带，但都比目的条带小，不知道是不是降解了，我用的老鼠肝脏组织，有一个多月了，保存在-80度冰箱，楼主帮忙分析看看有没有降解的可能啊？snowden0 ...
强少1988 请问细胞培养使用的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) (Gibco)，写文章的时候需要填产品公司，产地，国家这三个信息。大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Invitrogen, CA, USA)，或者写(Gibco, Carlsbad, CA, USA). 大鹏鸟 GIbco已经被Invitrogen收购，可以写Dulbecco's M ...
202zhaozhao 我买的DNASE1上面写着15000u是什么意思啊？麻烦知道的能告诉我，谢谢大家roy2929 u=unit酶都是用活力单位表示含量 一般不用摩尔质量selleckchem01 1U代表在1min内催化1微摩的底物发生反应的酶量~superldd 您好，我想请问，15000U等于多少mg呀，因为稀释时要求1mg/ml.谢谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...
yangguili 我今天赶上特殊情况，二抗没有了，请问磷酸化的一抗能孵育两个晚上吗？会不会有什么不好的影响？请各位大侠指导一下！万分感谢！selleckchem01 二抗是很便宜的东西，去别的实验室借一下就好了~毕竟一次做完结果会比较好~yangguili 谢谢楼上的同志本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
xiayuxue 请问小分量的蛋白比如14KD,用三抗是不是更好？xiayuxue 用 三抗有什么优势啊？请大家帮帮忙，wb怎么也做不出来小分子量的roy2929 三抗一般就是放大信号吧做不出来的原因很多啊 不说详细点不好讲xiayuxue 我就是想请教大家，在什么情况下才用三抗？ronaldo_zj 楼主您好！我也做过小分子量的蛋白，大概是15kD左右吧，我没有三抗，我自己的经验是：1. 电泳的时间一定不要太长，我把积层胶制的很厚，分离胶比 ...
淹没尘埃 我做的实验模型是血管性痴呆 ，需要把海马组织匀浆，然后从中提取线粒体，然后做COXII的RT-PCR,还有要用线粒体做别的三项检测，也不知道这个线粒体的量能不能足够哦，请问在这个海马组组织匀浆过程中，需要添加什么试剂吗？比如说线粒体提取剂什么的？请指点！谢谢！爱在进行时 下面给出一点参考步骤，希望有用：一、原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将 ...
liuzm021 如题，谢谢。xiaojianmao 都是离子，应该可以吧……建议灭完分装……看到染了直接丢掉……xiayuxue 可以呀，为什么不能？roy2929 补一点超纯水进去再灭吧，会有蒸发~liuzm021 多谢各位，我自己也觉得可以。不过最好还是少灭几次吧本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
firemoth 求助5-ht1a的下游信号通路图，如附件图片形式的，我查了好久都找不到，寻求大家帮忙，不胜感激。gongtj 不知是不是这个：http://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?hsa04726lz到KEGG里好好找一下呢。firemoth gongtj wrote:不知是不是这个：http://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?hsa04726lz到K ...
xiaoleishi 我现在做的是小胶质细胞，要做akt信号通路，但现在查到akt抑制剂有很多种，应该怎样选择？谢谢。pennhmp116 一般来说某个靶点抑制剂的研究也是不断进展的，随着化工技术和计算机模拟分析模拟技术进步，许多靶点上新的抑制剂都比早期的更为有效、更加具有特异性，水溶解性更好、性质更稳定等优点。除了靶点的活性外，其毒性也是决定它是否现在应用于动物体内实验，将来应用于临床成功与否的关键。如NF-kB抑制剂 ...
郑哲 我现在在做microRNA的生物信息学预测，有一个问题想请教，通过blast比对，得到了候选的EST序列之后，做二级结构预测时是用整个EST序列进行折叠，做二级结构预测，还是截取EST序列中，含有比对上的成熟micRNA序列的部分序列进行结构预测呢，因为我发现截取一部分和用整条序列进行折叠，得到的发卡结构不一致，谢谢！！！keathy0505 当然是用成熟microRNA序列部分做预测啊！郑哲 谢谢，请问你也是做小R ...
不安分得土壤 我做的实验是抗肿瘤药对肺纤维化干预作用，研究目标是验证抗肿瘤药是通过MAPK哪些通路起作用，分组如下：A 空白 对照组B TGF刺激组C TGF+ERK阻断剂PD98059D TGF+JNK阻断剂SP600125E TGF+P38阻断剂SB283580F TGF+抗肿瘤药我的困惑是 1：前期PCR做出来检测1、3型胶原SMA居然没有差异性，考虑为药物降解原因或者TGF配制时未按照说明书用柠檬酸活化 2：做WB检测P—ERK，P--P38、 ...
子尤的翅膀 各位同学，请问一下提取组织的核蛋白 那组织必须是新鲜的吗？如果保存在-80度近1年的可以用来提取核蛋白吗？谢谢各位啦xhjggl 没有反复冻过应该可以，子尤的翅膀 谢谢这里面没有提到提取组织核蛋白的要求 如果反复冻融是不是都降解了呢？selleckchem01 如果-80度一年的话，应该可以提取出来~但是反复冻融后，蛋白当然会比较容易降解~子尤的翅膀 谢谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...
sunyuzhu10 包装质粒是pMD2.G pMDLg/pRRE pRSV-Rev 过表达载体是pLVX-IRES-ZsGreen1这样的四个质粒能包装出慢病毒么？请有经验的战友帮忙看下暴君 可以的644414915 pMD2.G是VSVG吗我现在正在包病毒，别人给了我这四个质粒，别的什么都没说，我不知道该怎么包装装染谁有具体步骤转染质粒时量如何把握本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...
郑哲 我要做microRNA成熟体的荧光定量，内参为U6，现在有一个问题很纠结：我在做反转录时候，因为要做特异性的反转录，请问内参和小NRA是放在一个管子里，在同一个体系里面一起反转录出来，还是要将内参和小RNA分别反转录，如果一起反转录出来，反转录体系要怎样加呢，反转录过程中会不会有竞争！谢谢，急待回答！！！！ytxy 是在同一个管子里逆转录的，这样才能保证总RNA是一致的。因为引物序列不一样，结合的模板也是不同的。另外按 ...
dali321 在Bid 诱导的caspase-8 活化中 高浓度的药物中caspase-8蛋白的表达是增多还是减少右翼天使 在Bid 诱导的caspase-8 活化中 高浓度的药物中caspase-8蛋白的表达是增多casgene 不受影响。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
向左还是向右 我是第一次做实验，想从人的外周血中（加过抗凝剂的）取血清，然后用淋巴分离液提取单个核细胞，从单个核细胞中同时提取RNA和蛋白，不知有没有前辈做过类似实验，请赐教，十分感谢向左还是向右 我用的TRIZOL同时提取的RNA和蛋白，可是蛋白怎么也溶解不了，不知有没有好办法？大胜仔 首先呢，加过抗凝剂取的是血浆，不是血清，我也查了查“Ficoll密度梯度离心法”对于单个核细胞的提取这个方法好像好点儿本文由丁香园论坛提供 ...
蓝莓之夏 各位大侠：我做的是关于microRNA mimics 转染的实验，正在做预实验。之前从基因芯片中挑选出了microRNA, 然后合成了他的类似物，也就是mimics.。 我在转染进去24h之后，还要加入TGF-β进行刺激，观察转染的作用。现在我的问题是： 我选的microRNA mimics 是对细胞有保护抗纤维化作用的，TGF-β 是诱导纤维化作用的。转染进去又加入TGF之后，为什么转染了mimics的细胞的形态都是纤维化的摸样，而没有 ...
咪咪土拨鼠 各位大侠好，我是外科学的医学生，现在在实验，提的问题很弱智，大家勿拍。我做目的蛋白的western, 发现其在处理组有明显的分子量漂移，初步推测其为磷酸化改变---因为再同时加了一种激酶的抑制剂后，这种漂移消失了。但问题是，怎么证明它确实是磷酸化呢？我查了查文献，目前常用的是放射性P实验和质谱分析什么的，但这对于我们的条件和经费来说，似乎不太可能。我的问题：1. 是否可以在用RIPA裂解液提总蛋白时，加入蛋白磷酸酶（大 ...
roy2929 小弟新手 实验等等都不怎么懂，希望高手们帮忙。做TUNEL检测凋亡，除了本身没有发生凋亡和实验操作原因，还有什么可能会没有信号？比如通过其他不能用TUNEL检测到的方式发生了凋亡？不胜感激qwer_214 TUNEL是一种很特异的检测凋亡的方式，它主要检测DNA特异性的断裂，恕我资历比较浅，我到目前还没有发现其他用TUNEL检测到的方式发生了凋亡。roy2929 qwer_214 wrote:TUNEL是一种很特 ...
