一、核酸探针标记 核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。 核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀标记和末端标记探针。下面主要介绍双链DNA探针及 ...
一、目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式反应（RT-PCR）体外扩增目的DNA片段是目前最常用的方法。 （一）采用限制性酶切法直接分离目的基因 1. 从原核基因组中制备 原核 ...
在膜片钳技术的发展过程中，主要形成了四种记录模式，即细胞贴附模式（cell-attached mode或on-cell mode）、膜内面向外模式（inside-out mode）、膜外面向外模式（outside-out mode）、常规全细胞模式（conventional whole-cell mode）和穿孔膜片模式（perforated patch mode），如图11-2所示。根据研究目的和观察内容的不同，可采取相应的记录方法。此外，还有带核膜片 ...
运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究，是一项艰辛、细致、繁杂的工作，要求较高的技术水平和实验条件作保证，现在大致介绍一下膜片钳实验的过程，粗略地包括以下几个方面。1. 标本制备 根据研究目的的不同，可采用不同的细胞组织，如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等，现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所采用的细胞，必须满足实验要求，一般多采用酶解分离法，也可采用细胞培养法；另外，由于与分子生物学技术的结合，现在也运用分子克隆技术表达 ...
一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗，以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口，均已无菌密封包装，可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2～3次，晾干备用。细胞培养中的绝大部分器皿系玻璃制品，清洗过程为以下步骤。 1. 浸泡 新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所 ...
细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。 1. 细胞形态 生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细 ...
一、 人外周血染色体制备 1. 实验原理 人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead 提出来的。正常情况下，人外周血小淋巴细胞都处在G1期（或G0期），但在体外给予一定的条件，进行培养，经72 h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。 在培养液中加入植物血凝素（PHA），淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，可抑制细胞分裂时纺锤丝的形成，使细胞分裂停止在中 ...
一、原代培养及其操作步骤 原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。 1. 剪切组织 先将所取得的组织，用D-Hanks ...
血压和心电图是重要的生理指标。动物血压、心电图的测量方法与技术是机能实验教学所要求的基本的技能之一，也是心血管生理学、药理学研究所必备的实验技术之一。 本节主要介绍常用动物血压、室内压及心电图的测量方法与技术。 一、清醒大鼠的血压测定 清醒大鼠的血压测定有多种方法。按是否进行手术分为有创和无创；按测定方式分为直接和间接，一般直接法都是有创的。 直接法又分为导管法和换能器埋入腹腔遥测法，前者插入大鼠动脉的导管通过换能器与记录系 ...
膜片钳技术是在电压钳技术基础上发展起来的，电压钳是利用负反馈技术将膜电位在空间和时间上固定于某一测定值，以研究动作电位产生过程中膜的离子通透性与膜电位之间的依从关系。但电压钳只能研究一个细胞上众多通道的综合活动规律，而无法反映单个通道的活动特点，同时通过细胞内微电极引导记录的离子通道电流其背景噪声太大。膜片钳技术的优势是可利用负反馈电子线路，将微电极尖端吸附的1μm2至几个平方微米细胞膜的电位固定在一定 ...
一、血液流变学检测基本原理 血液流变学主要研究的是血液及其成分的流动性和变形性规律的科学。血液的流变性包括血液宏观流动性（黏度）、血细胞流变性（红细胞的聚集性和变形性）和血液生化物质对血液流变性的影响（纤维蛋白原，球蛋白）等三个方面。血液流变性异常在某些疾病，尤其是血栓性疾病的病因和发病机制中起重要作用。血液是一种非常特殊的悬浮液，作为溶剂的血浆不是均质的，而是含有各种分子量、分子形状和含量各不相同的蛋白质；作为悬浮 ...
一、实验动物的处死方法 1. 较大动物的处死方法 以下几种方法适用于豚鼠、猫、兔、狗等较大或更大一点的动物。 （1）空气栓塞法：将空气注入动物静脉，使之很快栓塞而死。当空气注入静脉后，可在右心随着心脏的跳动使空气与血液相混致血液成泡沫状，随血液循环到全身。如进入肺动脉，可阻塞其分支，进入心脏冠状动脉，造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，动物很快致死。一般兔、猫等需注入20～40ml。狗需注入80～150ml。这是最常用的一种方法。 （2 ...
一、实验动物的标记 1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）。标记的原则是：先左后右，从上到下。如果动物编号是二位数或三位数，那相应的用二种或三种不同的颜色，不同颜色代表不同位数（个位、十位、百位），标记的原则同上（图9-2）。 图9-22. 挂牌法 常用于大动物。写有编号的金属牌挂在动物的颈上来区分 ...
一、实验动物的用药途径及方法 动物给药的途径和方法可根据动物种类、实验目的和药物而定，常用的方法简介如下。 （一）经口给药 有口服与灌胃两种方法。口服法可将药物放入饲料或溶于饮水中，使动物自行摄取。为保证剂量准确，应使用灌胃法，适用于小白鼠、大白鼠及家兔等动物。 1. 小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃时将灌胃针安在注射器上，吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，用灌胃针管压其上腭，使口腔和食道成一条直线 ...
一、人类疾病动物模型概念及意义 人类疾病动物模型（animal models of human diseases）是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。应用动物模型是现代医学认识生命科学客观规律的实验方法和手段。通过动物模型的研究，有意识地改变那些自然条件下不可能或不容易排除的因素，以便更加准确地观察模型的实验结果，并将研究结果推及于人类疾病，从而有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生、发展规律和 ...
一、常用的医学实验动物 1. 小鼠（mouse, mus musculus） 医学实验中常用的小鼠，属于哺乳纲，啮齿目，鼠科，鼠属，小家鼠种动物。其体型小易捉，操作方便，而且其生长期短、成熟早、繁殖力强。性情温驯，胆小怕惊，对环境反应敏感。小鼠作为成熟的实验动物，具有很多的品系，是医学实验中用途最广泛和最常用的动物。适合作药物和肿瘤学研究。 2. 大鼠（rat, rattus noivegicus） 我国医学实验中常用的大鼠为大白鼠，属于脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目， ...
一、蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备 1. 实验原理 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 2. 实验器材与药品 蛙类手术器械和药品1套，包括：蛙板、小玻板各1块，粗剪刀、直剪刀各1把，大镊子、小镊子各1把，眼科剪刀1把、 ...
实验动物作为科学实验对象大大推动了生命科学的发展，特别是医学的发展。虽然目前开始使用一些动物模型以外的细胞、组织、器官以及基因材料用于科学研究和教学实验，但这些模型和材料不能完全模仿和替代人体或动物机体的复杂的生理环境，因此，仍需要使用活的动物进行实验，以进一步促进人类和动物健康相关的生命科学发展。 在进行动物实验中应该特别注意：一是正确选择实验动物，对所用动物必须了解其整体情况。二是保证动物应享有的福利权，在使 ...
一、医学实验动物的概念及意义 医学实验动物（medical experimental animals）是经人工科学育种、饲养和繁殖，受遗传学、微生物学和寄生虫学控制，供生物医学实验用的动物。其遗传背景明确，来源清楚，具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验的再现性。 医学实验动物是生物医学研究不可缺少的部分之一，研究成果的水平高低与动物实验密切相关，它直接影响着研究工作的顺利进行。 二、医学实验动物的类型 （一）普通实验动物（Gen ...
将两个电极插在电解溶液中，通上直流电，带电颗粒在电场力作用下向所带电荷相反的电极泳动，即正离子则向负极移动，而负离子向正极移动，这种现象就是我们熟悉的电泳现象，也称“电泳”。能够给电泳装置提供一定电压、电流条件的稳定直流电流装置称“电泳仪”。许多重要的生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都含有可电离基团，在非等电点条件下均带有电荷，在电场力的作用下，它们将向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳技术就是利用样品 ...
