免疫荧光单标检测
上海歌凡生物科技有限公司
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免疫荧光实验步骤
柠檬酸钠抗原修复液修复。
抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封闭 3-5%BSA或者1-2%FBS封闭30min
六．除去封闭液液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜。
抗体稀释液：1%FBS溶液（可以加0.01%叠氮钠）
七．洗一抗:PBS洗3遍，每次5min。
八．孵二抗2h(室温)FITC标记山羊抗兔二抗;Cy3标记驴抗山羊二抗
九．洗二抗 PBS洗3遍，每次5min
十．擦干标本边缘水分，加DAPI（1ug/ml）5min;
十一.PBS洗3遍，每遍3min，加mouting（sigma M1289）,盖盖玻片，指甲油封片。
- 脱蜡至水
- 二甲苯Ⅰ(8min)
- 二甲苯Ⅱ(8min)
- 无水乙醇和二甲苯1:1(5min)
- 无水乙醇(3min)
- 95%乙醇(3min)
- 85%乙醇(3min)
- 75%乙醇(3min)
- PBS洗3遍
柠檬酸钠抗原修复液修复。
抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封闭 3-5%BSA或者1-2%FBS封闭30min
六．除去封闭液液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜。
抗体稀释液：1%FBS溶液（可以加0.01%叠氮钠）
七．洗一抗:PBS洗3遍，每次5min。
八．孵二抗2h(室温)FITC标记山羊抗兔二抗;Cy3标记驴抗山羊二抗
九．洗二抗 PBS洗3遍，每次5min
十．擦干标本边缘水分，加DAPI（1ug/ml）5min;
十一.PBS洗3遍，每遍3min，加mouting（sigma M1289）,盖盖玻片，指甲油封片。
