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免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验

相关实验:免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验

别名:immunofluorescence

最新修订时间:

简介

抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)是针对细胞核成分的自身抗体,没有器官和种系特异性,ANA 阳性提示患有 SLE 或风湿病等自身免疫性疾病。免疫荧光(immunofluorescence)标记技术,是基于免疫学抗原-抗体特异性反应原理,应用荧光素标记抗原或抗体,检测目的抗原或抗体的方法,常用于组织或细胞抗原或抗体检测,也可用于液相抗原或抗体检测,如免疫荧光抗体技术、流式细胞术等。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中广泛应用。

原理

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验的基本原理是在生物薄片(Hep-2 细胞+灵长类肝脏冰冻切片)上滴加待测血清(大于 1:100 稀释度),血清中的 ANA 能与细胞核抗原成分特异性结合,而未结合游离抗体经洗涤后去除。形成的免疫复合物通过与 FITC 标记羊抗人 IgG 结合,在荧光显微镜下,细胞核显示黄绿色荧光,提示血清中 ANA 的存在。

材料与仪器

器材:


① 封片介质和盖玻片、荧光显微镜、待检血清


② 阳性血清(SLE 患者血清)、阴性血清(健康人血清)


③ 生物薄片(分别包被 Hep-2 细胞和猴肝)


试剂:

① 0.05% Tween20/PBS,pH7.4 洗液

② FITC-羊抗人 IgG 抗体

步骤

免疫荧光技术检测血清中抗核抗体实验的基本过程可分为如下几步:

A. 取一张生物薄片加 1:100 稀释的患者血清 25 μl,室温,30 分钟。

B. 取出生物薄片,以 PBS 冲洗 1 次,PBS 浸泡 5 分钟,滤纸沥干。

C. 加 FITC-羊抗人 IgG 荧光抗体 20 μl,30 分钟,室温。

D. 取出生物薄片洗涤,方法同(2)。

E. 滴加磷酸盐缓冲甘油封片、镜下观察。

注意事项

1 如果背景较深,可采用 0.05% Tween20-PBS 清洗以去除非特异性结合。

2 添加荧光素标记抗体后应避光操作,防止荧光淬灭。

3 设置阳性和阴性对照组。

来源:丁香实验

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