酵母细胞RNA的提取与沉淀分离

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一、原理：酵母细胞置于含有SDS的缓冲溶液中，加等体积的苯酚水溶液，通过激烈振荡一段时间，将RNA和蛋白质分开，然后离心分层，RNA溶于上层水溶液中，DNA和蛋白质在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。
二、材料与试剂：新鲜湿酵母、SDS-Tris缓冲液（0.3％SDS，0.01MMgCL₂ ，0.1MTris，用HCL调至PH7.2）、苯酚水溶液（90％，W/V）、20%乙酸钾水溶液、95％乙醇
三、操作方法
1、取10ml酵母浓缩液（约5g左右湿酵母），加入4mlSDS-Tris缓冲液，再加入6ml90％苯酚水溶液。
2、在室温激烈振荡1h，然后冷却至0－4℃，以下操作均在0－4℃进行。
3、上述提取液以4000r/min，离心5min。
4、分离出上层水相加入1/10体积的乙酸钾溶液，再加入2倍体积的95％乙醇。在－16℃作于放置使RNA沉淀析出。此沉淀可在冰箱中长期保存。