大蒜细胞SOD的提取与沉淀分离

相关专题

 

一、超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用PH7.8的磷酸缓冲液 提取。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。

二、材料与试剂：大蒜、磷酸缓冲液(0.05M，PH7.8的磷酸缓冲液)、氯仿-乙醇混合溶剂(氯仿：无水乙醇=3：5V/V)、丙酮(用前冷却4-10℃)、磷酸盐缓冲液(0.05M，PH10.2)

三、操作方法

1、组织或细胞破碎：称取5g左右大蒜，置于研磨器中研磨，使组织或细胞破碎。

2、SOD的提取：将上述破碎的组织，加入2-3(10-20ml)倍体积的0.05M，PH7.8的磷酸缓冲液，继续研磨搅拌20min，使SOD充分溶解到缓冲液中，然后用离心机 在5000r/min下，离心15min，弃沉淀，得提取液。

3、除杂蛋白：提取液加入0.25倍体积得氯仿-乙醇混合溶剂搅拌15min，5000r/min离心10min得SOD沉淀。