动物胃黏膜上皮细胞的培养

实验材料：

1. 动物胎体胃黏膜，胃溃疡或胃癌手术切除的正常胃黏膜组织

2. 1%Ⅳ胶原蛋白或1%明胶铺培养瓶，4℃冰箱内过夜，使用前在37℃培养箱内放置2h，然后用培养液浸洗1次。

3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4

4. 250000U/LⅠ型胶原酶或125000U/LⅠ型胶原酶和0.5%透明质酸酶，DMEM配置

5. 解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 取妊娠19-21d胚胎大鼠，切开腹壁，取胃底部黏膜组织，放入预冷的PBS中，然后冲洗3次。

2. 在解剖显微镜下，用眼科镊仔细剥除黏膜固有层。将黏膜上皮组织剪成1mm3 左右的小块。

3. 将组织块放入消化液中，在37℃条件下消化1-3h。然后，加入含血清培养液，终止消化。

4. 用200目不锈钢筛网滤出组织块，收集滤液，离心（1500r/min，5min）。用PBS洗涤2次。

5. 离心后，吸去上清液，加入培养液，混悬沉淀细胞。将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中，放入37℃，含5%CO2 的孵箱中培养24h

6. 吸去培养液，用PBS浸洗。然后，加入培养液，继续培养。以后每隔2-3d换液1次。