PCR反应体系的Mg2+的浓度
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PCR 反应体系的Mg2+ 的浓度
Mg2+ 是Taq DNA聚合酶活性所必需的,Mg2+ 浓度除影响酶活性与忠实性外,也影响引物的退火, 模板与PCR产物的解链温度,产物的特异性引物二聚体的形成等。Mg2+ 浓度过低时,酶活力明显降低;过高时,酶可催化非特异性扩增。PCR中Mg2+ 浓度在0.5～2.5mmol/L之间。如果溶液中存在EDTA,或在引物贮备液中有其他螯合物或者DNA模板,会干扰Mg2+ 的浓度。因此,要适当调整Mg2+ 的用量。
Mg2+ 浓度优化法:首先须知模板DNA量,引物和dNTP的浓度和设定的PCR循环参数。反应中的PCR缓冲液中不加Mg2+ 。Mg2+ 是从10mmol/L MgCl2贮存液中逐一加入反应管中。开始以0.5mmol/L递增(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5～5.0mmol/L),在确定了Mg2+ 的适宜浓度以后,再以0.2mmol/L递增和递减n个浓度,来确定Mg2+ 的最适浓度。
