组织DNA的提取和纯化

[原理]

本法用含EDTA的溶液洗涤细胞，SDS（十二烷基硫酸钠）破碎、裂解细胞，消化蛋白质，使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活，用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质，最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。

[试剂]

1.裂解缓冲液

2.苯酚-氯仿溶液

3.氯仿-异戊醇溶液

4.冰无水乙醇及70%乙醇

5.TE缓冲液

6.5mol/L NaCl

[操作]

1.处死小白鼠一只，取新鲜肝脏，用生理盐水清洗去血水。

2.每克组织加10ml裂解液制成匀浆。

3.取2ml匀浆于离心管中，加等体积苯酚-氯仿溶液，加盖，缓缓来回颠倒5min，离心2500rpm×10min。

4.取上层水相，加等体积氯仿-异戊醇溶液，加盖，缓缓来回颠倒5min，离心2500rpm×10min。

5.取上层水相至玻璃管内，加5mol/L NaCl至终浓度为0.3mol/L（2ml 100μl，3ml 150μl）。

6.加2.5倍体积的冰无水乙醇，加盖，缓慢摇匀，见白色絮状沉淀DNA出现。

7.用玻棒捞起DNA沉淀置于试管中，用1mlTE溶解。

8.定量

吸取DNA溶液100μl 2.9mlTE（30倍稀释），在260nm和280nm下读取吸光度值，

9.计算

DNA浓度（ug/ml）=A260 nm×50×1/光径×稀释倍数