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新鲜或冷冻组织中病毒 DNA 的提取

相关实验:病毒 DNA 的提取实验

最新修订时间:

原理

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材料与仪器

新鲜或冷冻组织
匀浆缓冲液 裂解液
剪刀 匀浆器 离心机

步骤

1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织,在冰浴上剪成小碎块。


2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中,按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液,混匀,制成匀浆液。


3. 将匀浆液移人 Ep 管, 5000 r/min 离心10 min, 弃上清液。


4. 加 10 mmol/L PBS(pH 7.4)悬起沉淀,每0.1g 原始组织加1ml, 5000 r/min 离心 10 min,弃上清液。


5. 加裂解液悬起沉淀,每 0.1g原始组织加1ml, 55℃作用 30~60 min,然后于95℃, 10 min灭活蛋白酶 K 。


6. 1000 r/min 离心5 min, 取上清液做 DNA 模板, 4℃保存备用。

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注意事项

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常见问题

1. 匀浆缓冲液 由 0. 25 mmol/L 蔗糖、25mmol/L Tris-HCl(pH 7.5)、25mmol/L NaCl 和25mmol/L MgCl2 组成。


2. 裂解液由 50 mmol/L Tri s-HCl (pH 8.3) 、1 mmol/L EDTA 、0.5 % Tween-20 和200µg/ml 蛋白酶 K 组成。

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来源:丁香实验

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