病毒 DNA 的提取实验
最新修订时间：
简介
在用PCR技术检测病毒DNA和RNA过程中，病毒核酸的提取，也即DNA模板的制备，至关重要。来源：《病毒学检验》
来源：丁香实验
操作方法
1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀， 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀，再重复离心 1次，弃上清液。3. 用 117µL 裂解缓冲液 B 溶解沉淀， 70℃作用 5 min, 待冷却至 55℃时加入3µL 蛋白酶 K, 并保温1h 消化细胞， 95℃ 10 min 灭活蛋白酶 K 。4. 加入 2 mol/L
培养细胞中病毒 DNA 的提取1. 贴壁培养细胞倾去培养液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液，用 PBS 悬浮细胞，离心洗涤 2~3次，用 PBS 重新悬浮细胞， 3500 r/min, 弃上清液。2. 悬浮细胞的培养 移入 Ep 管中，以 2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液，用 PBS 悬浮细胞，余下的操
新鲜或冷冻组织中病毒 DNA 的提取1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织，在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中，按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液，混匀，制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管， 5000 r/min 离心10 min, 弃上清液。4. 加 10 mmol/L PBS(pH 7.4)悬起沉淀，每0.1g 原始组织加1ml, 5000 r/min 离心 10 min,弃上清液。5. 加裂解液
拭子标本中病毒 DNA 的提取预操作：将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中，洗下标本。若标本在 4 h 内处理，可置于室温保存，否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min, 沉淀细胞。2. 吸去上清液，若有血液残留，可1 ml TE 缓冲液悬浮细胞，移至Ep管中，重复离心1次。3. 去上清液，如仍有血液残留，可重复第 2 步，直至沉淀物中无红细胞痕迹
