MTT测定CMC的操作步骤

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不可不知的细胞检测方法——MTT

1. Fen细胞培养 于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05%胰蛋白酶，0.02% EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。

2. 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时，让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液，效靶比10：1到50：1，继续培养4小时，让效应细胞发挥杀伤效应。实验中，设立只有靶细胞的无杀伤对照和只有 效应细胞的阴性对照，每种处理设3各复孔。

3. 用含2%小牛血清的RPMI-1640 培养液洗涤各孔 3次，洗去不粘附的细胞。每孔加 0.1ml含2%小牛血清的RPMI-1640培养液和10μl 5mg/ml的MTT染液，继续培养3小时。

4. 用PBS 洗涤2次，每孔加0.1ml含0.04mol/L HCl的异丙醇，室温30分钟，溶解形成的结晶。在570nm波长处，用酶联检测仪检测各孔的光吸收值(OD)。杀伤活性(%)=(OD实验孔-OD阴性对照) /OD无杀伤对照× 100