从噬菌体文库中提取DNA操作步骤

相关专题

 

&NBS p;

1取5ml噬菌体溶液放入无菌干净的小烧杯中，缓缓加入固体NaCl，使其终浓度为1M(0.292g),充分溶解后冰浴1小时。

24℃下11000rpm离心10min，取上清液于另一个干净烧杯中，将PEG6000加入烧杯中使其终浓度为10%W/V,约0.5克)，磁力棒缓慢搅拌，冰水浴1.5小时，于4℃，15000rpm离心15min，弃上清。

3将沉淀溶于300μlTE(pH8.0)，加等体积的酚/氯仿/异戊醇(25：24：1)，吸吐混匀。

44℃，15000rpm离心15min，取上清液。

5在剩下的酚氯仿异戊醇的溶液中再加入200ul的TE，吸吐混匀。

64℃，15000rpm离心15min，取上清液。

7将由4和6获得的上清液混合，加等体积的氯仿，吸吐混匀后，4℃，15000rpm离心15min。

8加入1/10体积的3MNaAc(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇吸吐混匀后至于-80℃30min以上，于4℃，15000rpm离心15min，弃上清。

9沉淀用70%乙醇洗2-3次，最后一次在4℃，15000rpm离心5min。

10用冰乙醇洗1-2次除去水份。

11沉淀烘干后加入200μlTE，测定DNA浓度，-20℃保存备用。