想咨询一下大家，有没有生物学领域，构建过T7噬菌体cDNA展示文库的铁汁呀？

可以交流，做过噬菌体构建方面的工作

具体哪方面的T7噬菌体cDNA

1.RNA提取：

2.反转录获取cDNA

3.抗体片段扩增

4.克隆至噬菌体质粒：将上一步扩增得到的多样化抗体基因序列和噬菌体载体进行酶切，各自纯化并进行链接反应。将连接产物使用DNA纯化回收试剂盒按说明书回收，并使用超纯水溶解。

5.转化TG1：提前将无菌的电转杯置于冰上预冷，待TG1感受态细胞50 µL融化后加入100 ng回收后的连接产物，将混合后的感受态细胞和连接产物转移到预冷好的电转杯中，使用电转仪预设的Bacteria转化程序电击转化，电转后立即往电转杯中加入1 mL SOC培养基，至少进行20个电转，将细胞37℃复苏60分钟后涂在含有氨苄抗性的LB培养板上过夜生长。将上一步过夜生长后的培养板上的细胞用2xYT培养基和涂布棒冲洗刮下，加入20%的甘油测OD600nm值后保存在-80℃，即为菌库。

6.扩增和纯化噬菌体文库：将上一步刮下的菌体混匀后将数目约为10^9个细菌转移到100 mL预先加入氨苄抗生素的2x YT培养液中，37℃ 220 rpm培养直至OD600nm达到0.5。按照辅助噬菌体：细菌细胞数目为20:1的比例加入辅助噬菌体后继续37℃培养30分钟。加入终浓度为50 µg/mL的卡那霉素，30℃过夜摇床培养。将过夜培养的细菌4℃ 13000 rpm离心5分钟，将上清转移到新的离心管后加入1/4体积预冷的 5x PEG8000/NaCl，在冰上孵育30-60分钟。4℃ 13000 rpm离心10分钟去除上清后加入1 mL PBS缓冲液溶解沉淀。再次加入250 µL 5X PEG8000/NaCl 后冰上孵育10分钟，4℃ 16000 xg离心15分钟后去除上清并将沉淀溶解在1 mL PBS中得到噬菌体库，长期-80℃保存，短期（1-2周）可于-20℃放置保存。