Agan9N1E
研一导师想让我开始一个噬菌体的课题,以前课题组都没做过。最近在分离的铜绿假单胞菌的噬菌体时遇到了一些问题。很多时候用点滴法能看到有浑浊的透明圈,到双层平板得不到噬菌斑是什么原因。而且感觉点滴法得到的透明圈边界太平滑了,和滴上去的富集液边缘一致,但是透明圈的透明程度和富集液的稀释倍数又相关,这是什么原因呀?到底这是有噬菌体还是没有?之前用别人给的噬菌体做点滴做出的透明圈边缘是不规则的呀!
loveliufudan
分离噬菌体的过程中可能会遇到一些问题,下面我将针对您提出的问题给出一些可能的原因和建议:
点滴法得到的透明圈边界太平滑:可能是由于您使用的富集液中含有较高浓度的蛋白质,这些蛋白质在接种到双层平板后可能会形成膜,导致噬菌斑无法形成,因此看到的透明圈边界会很平滑。您可以尝试使用不同浓度的富集液,或者对富集液进行预处理,如离心去除蛋白质等。
点滴法得到的透明圈和浓度叉相关:这可能是因为您的噬菌体富集液中含有较多的杂菌,导致富集液中的噬菌体浓度与杂菌浓度相关。建议您对噬菌体富集液进行更多的处理和纯化,如使用Peg沉淀、超滤、密度梯度离心等方法。
无法在双层平板上得到噬菌斑:这可能是因为您的富集液中的噬菌体数量太少,或者您的双层平板培养条件不够优化。建议您尝试增加富集液中的噬菌体数量,或者优化双层平板的培养条件,如使用不同的菌落计数平板、调整富集液的pH值等。
点滴法得到的透明圈边界太规则:这可能是因为您使用的噬菌体富集液中的噬菌体种类较单一,或者您的富集方法存在一定的偏差。建议您尝试使用不同来源的噬菌体富集液,或者尝试使用不同的富集方法和培养条件。同时,在点滴法中,不同的噬菌体可能会在培养基上呈现不同的透明圈边界,这也需要进行更多的实验验证。
土井挞克树
单板上的的确是噬菌斑,双层不长的原因可能是接种量太小了,建议增大接种量并且延长孵育时间
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