【求助】关于靶蛋白预测
丁香园论坛
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采用双报告基因,
我和一位师兄做不同的寡核苷酸跟不同的基因的3‘utr作用。
比如mir-1 and pmir-report-A3'UTR
mir-1 and pmir-report-B3'UTR
为什么我按照师兄的各个量转染,renilla的数值我们差不多,但是目的的数值,我的是overload,师兄的却比较小呢?
难道跟构建进去的3’UTR有很大关系吗?
谢谢!
另外,附带问一下,3;UTR采用合成几十bp的寡核苷酸,然后2条退火,包含作用位点,跟直接pcr3'utr甚至是全长3'UTR,,哪一个好?
我和一位师兄做不同的寡核苷酸跟不同的基因的3‘utr作用。
比如mir-1 and pmir-report-A3'UTR
mir-1 and pmir-report-B3'UTR
为什么我按照师兄的各个量转染,renilla的数值我们差不多,但是目的的数值,我的是overload,师兄的却比较小呢?
难道跟构建进去的3’UTR有很大关系吗?
谢谢!
另外,附带问一下,3;UTR采用合成几十bp的寡核苷酸,然后2条退火,包含作用位点,跟直接pcr3'utr甚至是全长3'UTR,,哪一个好?
你的实验组相对于对照组是阳性反应吗,是的话,就没必要强求检测值的差异,因为荧光酶报告基因检测本来就是存在较大的偏差的,不然干嘛倡导要做荧光素酶双报告基因呢:P
而且还要多次重复计荧光数值,与多次重复转染实验呢,取统计意义的数值呢:)
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师兄微信号:shixiongcoming