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内切酶的热失活参数

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15007

热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃,温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。

在50μl的反应体系中,37℃条件下,以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物,加入5-10μl内切酶及相应缓冲液,反应60分钟,然后升温至65℃或80℃温育20分钟进行热失活。在上述混合液中加入0.5μg底物DNA(通常为λDNA),调节温度至最适反应温度,温育60分钟。若琼脂糖电泳显示底物部分或完全被消化,则表明该酶没有完全被热失活。

Enzyme Heat Inactivation (temperature)
Aat II Yes (65°C)
Acc I Yes (80°C)
Acc65 I Yes (65°C)
Aci I Yes (65°C)
Acl I No
Acu I Yes (65°C)
Afe I Yes (65°C)
Afl II Yes (65°C)
Afl III Yes (80°C)
Age I Yes (65°C)
Ahd I Yes (65°C)
Ale I Yes (65°C)
Alu I Yes (65°C)
Alw I Yes (65°C)
AlwN I Yes (65°C)
Apa I Yes (65°C)
ApaL I No
ApeK I No
Apo I Yes (80°C)
Asc I Yes (65°C)
Ase I Yes (65°C)
AsiS I Yes (80°C)
Ava I Yes (80°C)
Ava II Yes (65°C)
Avr II No
Bae I Yes (65°C)
BamH I No
Ban I Yes (65°C)
Ban II Yes (65°C)
Bbs I Yes (65°C)
Bbv I Yes (65°C)
BbvC I Yes (80°C)
Bcc I Yes (65°C)
BceA I Yes (65°C)
Bcg I Yes (65°C)
BciV I Yes (65°C)
Bcl I No
Bfa I Yes (80°C)
BfrB I Yes (80°C)
BfuA I Yes (65°C)
BfuC I Yes (80°C)
Bgl I Yes (65°C)
Bgl II No
Blp I No
Bme1580 I Yes (80°C)
BmgB I Yes (65°C)
Bmr I Yes (65°C)
Bmt I Yes (65°C)
Bpm I Yes (65°C)
Bpu10 I Yes (80°C)
BpuE I Yes (65°C)
Bsa I Yes (65°C)
BsaA I Yes (80°C)
BsaB I Yes (80°C)
BsaH I Yes (80°C)
BsaJ I Yes (80°C)
BsaW I Yes (80°C)
BsaX I No
BseR I Yes (65°C)
BseY I Yes (65°C)
Bsg I Yes (65°C)
BsiE I Yes (80°C)
BsiHKA I Yes (80°C)
BsiW I Yes (80°C)
Bsl I Yes (80°C)
Bsm I Yes (80°C)
BsmA I Yes (80°C)
BsmB I Yes (80°C)
BsmF I Yes (80°C)
BsoB I No
Bsp1286 I Yes (65°C)
BspCN I Yes (80°C)
BspD I Yes (65°C)
BspE I Yes (80°C)
BspH I Yes (65°C)
BspM I Yes (65°C)
Bsr I Yes (80°C)
BsrB I Yes (80°C)
BsrD I Yes (80°C)
BsrF I No
BsrG I Yes (80°C)
BssH II Yes (80°C)
BssK I Yes (80°C)
BssS I Yes (80°C)
BstAP I Yes (80°C)
BstB I No
BstE II No
BstF5 I No
BstN I No
BstU I No
BstX I Yes (65°C)
BstY I Yes (80°C)
BstZ17 I No
Bsu36 I Yes (80°C)
Btg I Yes (80°C)
BtgZ I Yes (80°C)
Bts I Yes (80°C)
Cac8 I Yes (65°C)
Cla I Yes (65°C)
CviA II Yes (65°C)
Dde I Yes (65°C)
Dpn I Yes (80°C)
Dpn II Yes (65°C)
Dra I Yes (65°C)
Dra III Yes (65°C)
Drd I Yes (65°C)
Eae I Yes (65°C)
Eag I Yes (65°C)
Ear I Yes (65°C)
Eci I Yes (65°C)
EcoN I Yes (65°C)
EcoO109 I Yes (65°C)
EcoR I Yes (65°C)
EcoR V Yes (80°C)
Fat I Yes (65°C)
Fau I Yes (65°C)
Fnu4H I Yes (65°C)
Fok I Yes (65°C)
Fse I Yes (65°C)
Fsp I Yes (65°C)
Hae II Yes (80°C)
Hae III Yes (80°C)
Hga I Yes (65°C)
Hha I Yes (65°C)
HinP1 I Yes (65°C)
Hinc II Yes (65°C)
Hind III Yes (65°C)
Hinf I Yes (80°C)
Hpa I No
Hpa II Yes (65°C)
Hph I Yes (65°C)
Hpy99 I Yes (65°C)
Hpy188 I Yes (65°C)
Hpy188 III Yes (65°C)
HpyCH4 III Yes (80°C)
HpyCH4 IV Yes (65°C)
HpyCH4 V Yes (65°C)
I-Ceu I Yes (65°C)
I-Sce I Yes (65°C)
Kas I Yes (65°C)
Kpn I No
Mbo I Yes (65°C)
Mbo II Yes (65°C)
McrBC Yes (65°C)
Mfe I Yes (65°C)
Mlu I Yes (65°C)
Mly I Yes (65°C)
Mme I Yes (80°C)
Mnl I Yes (65°C)
Msc I Yes (65°C)
Mse I Yes (65°C)
Msl I Yes (65°C)
Msp I Yes (65°C)
MspA1 I Yes (65°C)
Mwo I No
Nae I Yes (65°C)
N.Alw I Yes (80°C)
Nar I Yes (65°C)
N.BbvC IA Yes (80°C)
N.BbvC IB Yes (80°C)
N.BstNB I Yes (80°C)
Nci I No
Nco I Yes (65°C)
Nde I Yes (65°C)
NgoM IV Yes (80°C)
Nhe I Yes (65°C)
Nla III Yes (65°C)
Nla IV Yes (65°C)
Not I Yes (65°C)
Nru I Yes (65°C)
Nsi I Yes (65°C)
Nsp I Yes (65°C)
Pac I Yes (65°C)
PaeR7 I No
Pci I Yes (65°C)
PflF I Yes (65°C)
PflM I Yes (65°C)
Pho I No
PI-Psp I No
Pl-Sce I Yes (65°C)
Ple I Yes (65°C)
Pme I Yes (65°C)
Pml I Yes (65°C)
PpuM I No
PshA I Yes (65°C)
Psi I Yes (65°C)
PspG I No
PspOM I Yes (65°C)
Pst I Yes (80°C)
Pvu I Yes (80°C)
Pvu II No
Rsa I Yes (65°C)
Rsr II Yes (65°C)
Sac I Yes (65°C)
Sac II Yes (65°C)
Sal I Yes (65°C)
Sap I Yes (65°C)
Sau96 I Yes (80°C)
Sau3A I Yes (65°C)
Sbf I Yes (65°C)
Sca I Yes (80°C)
ScrF I Yes (65°C)
SexA I Yes (65°C)
SfaN I Yes (65°C)
Sfc I Yes (65°C)
Sfi I No
Sfo I Yes (65°C)
SgrA I Yes (65°C)
Sma I Yes (65°C)
Sml I No
SnaB I Yes (80°C)
Spe I Yes (65°C)
Sph I Yes (65°C)
Ssp I Yes (65°C)
Stu I Yes (65°C)
Sty I Yes (65°C)
StyD4 I Yes (65°C)
Swa I Yes (65°C)
Taq I Yes (80°C)
Tfi I No
Tli I No
Tse I No
Tsp45 I No
Tsp509 I No
TspR I No
Tth111 I No
Xba I Yes (65°C)
Xcm I Yes (65°C)
Xho I Yes (65°C)
Xma I Yes (65°C)
Xmn I Yes (65°C)
Zra I Yes (80°C)

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